利用高效液相色谱（HPLC）和高效薄层色谱（HPTLC）方法对人类血浆中二甲双胍、利格列汀和恩格列净的水平进行绿色评估：一项药代动力学研究

《BMC Chemistry》：Green evaluation of human plasma levels of metformin, linagliptin, and empagliflozin using HPLC and HPTLC methods: a pharmacokinetic study

开发了高效液相色谱法和高效薄层色谱法用于同时测定人血浆中甲苯磺酸二甲双胍、利格列汀和恩格列净，并成功应用于药代动力学研究，验证方法准确可靠且具有临床应用价值。

　　

摘要

本文开发并验证了两种简单、快速、经济且环保的色谱方法，用于同时测定人血浆中的二甲双胍（MEF）、利格列汀（LIN）和恩格列净（EMP），并成功应用于药代动力学研究。血浆样品的制备采用了一种简单的蛋白质沉淀技术，使用乙腈：甲醇：三氯乙酸（体积比50:49:1）混合物，该方法具有较高的提取回收率且基质干扰较小。第一种方法基于高效液相色谱（HPLC）结合二极管阵列检测器（HPLC–DAD），使用ODS Hypersil C18柱，以乙腈、甲醇和磷酸盐缓冲液（pH 3）（体积比40:40:20）为流动相，流速为1.3 mL/min，在230 nm处进行检测。第二种方法采用高效薄层色谱（HPTLC）结合密度计检测，在225 nm处进行检测，使用硅胶60 F254板以及正己烷：甲醇：冰醋酸（体积比6:3:1）作为展开剂。使用HPLC方法时，MEF的浓度范围为85–1650 ng/mL、EMP为50–1100 ng/mL、LIN为45–950 ng/mL，均表现出优异的线性；使用HPTLC方法时，相应浓度范围分别为500–2800 ng/mL、100–800 ng/mL和50–550 ng/band，相关系数均超过0.998。HPLC方法的定量下限分别为MEF 85 ng/mL、EMP 50 ng/mL和LIN 45 ng/mL。这两种方法均满足欧洲药品管理局的指导原则，具有满意的准确度、精密度（>92%）、稳定性以及可忽略的基质效应。这些经过验证的方法成功应用于健康志愿者的药代动力学研究，得到MEF的平均Cmax值为877.5 ± 162.2 ng/mL、EMP为576 ± 87.5 ng/mL、LIN为680.8 ± 7.9 ng/mL，Tmax值分别为2.42 ± 0.38 h、1.5 ± 0.61 h和5.3 ± 0.52 h。所得药代动力学参数与文献报道一致，证实了所提出的绿色生物分析方法的可靠性和临床适用性。