Myh11 单倍体不足在小鼠模型中再现了巨膀胱症（Megacystis）和排尿功能障碍（Voiding Dysfunction），该模型属于 MMIHS（多发性黏膜下囊肿病）的一种类型
《Journal of Pediatric Urology》：Myh11 Haploinsufficiency Recapitulates Megacystis and Voiding Dysfunction in a Mouse Model of MMIHS
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MMIHS研究建立Myh11敲除小鼠模型，发现其呈现膀胱体积增大、平滑肌增厚、胶原沉积及排尿功能障碍，证实Myh11对膀胱结构和功能的重要性。
Jing-yuan Song|Wan-lun Wang|Tong-jia Liu|Hudeer Song|Chen-xi Yang|Yu-qi Zhang|Peng-fei Li|Rui Xiao
内蒙古医科大学分子病理学重点实验室，中国内蒙古自治区呼和浩特市010059
摘要
背景
巨膀胱-微结肠-肠道蠕动减退综合征（MMIHS）是一种致命的罕见疾病，其特征是膀胱和结肠平滑肌功能障碍。MYH11基因的突变已被确定为MMIHS的致病因素之一。
目的
本研究旨在构建Myh11敲除小鼠模型，评估膀胱和肠道的表型和功能，并探讨Myh11缺乏与MMIHS核心临床特征之间的关联。
研究设计
通过RT-PCR和Western blot检测基因表达。利用免疫组化技术确定蛋白质的定位和表达情况。通过苏木精-伊红（H&E）和Masson染色评估组织形态学变化。通过尿量测定和排尿后残余尿量分析膀胱功能，使用肌肉张力测定法测量平滑肌收缩力。通过已建立的胃肠道转运试验评估肠道运动性，并通过BrdU掺入试验检测细胞增殖。
结果
与野生型小鼠相比，Myh11+/-杂合子小鼠在膀胱组织中的Myh11表达水平（mRNA和蛋白质）显著降低（P < 0.001）。免疫组化染色显示Myh11主要表达在膀胱平滑肌中，Myh11+/-小鼠的膀胱中其表达水平显著降低（P < 0.01）。表型上，Myh11+/-小鼠表现出膀胱体积明显增大（P < 0.05）、膀胱与体重比增加（P < 0.01）、平滑肌层增厚（P < 0.01）以及胶原沉积增多（P < 0.01）。功能上，Myh11+/-小鼠的排尿频率和总尿量减少（P < 0.05）、残余尿量增加（P<0.001）、膀胱收缩缓慢（P < 0.01），同时伴有轻度肠道运动障碍（首次排黑便时间延长，P < 0.05）和粪便水分含量升高（P<0.05）。在分子水平上，PCNA蛋白表达上调和BrdU掺入增加表明细胞增殖活跃（P<0.05）。
讨论
Myh11+/-小鼠成功再现了MMIHS的核心膀胱表型，包括巨膀胱和排尿功能障碍。这证实了Myh11在膀胱发育和收缩功能中的关键作用，从而为深入研究MMIHS的病理机制提供了可靠的体内模型。
结论
Myh11缺乏导致膀胱显著增大、平滑肌增厚、胶原沉积以及排尿功能障碍，建立了良好的MMIHS疾病模型。
引言
巨膀胱-微结肠-肠道蠕动减退综合征（MMIHS）是一种主要表现为平滑肌细胞功能障碍的罕见疾病[1]，主要影响膀胱和胃肠道[2]。该综合征的标志性特征包括膀胱显著增大、小肠和结肠发育异常以及肠道运动性降低[3], [4], [5]。自1976年首次描述以来，截至2021年全球报告的病例约为450例[6]，表明其发病率极低。然而，MMIHS预后较差，早期数据显示生存率仅为12.6%[7]。尽管在专科支持性护理、肠外营养和器官移植技术方面取得了进展，最近生存率已显著提高到55.6%[8]。尽管如此，受影响的婴儿仍面临高风险，尤其是在生命的前六个月，此时死亡率最高[9]，对儿童生存和健康构成严重威胁。很少有病例能存活至成年[10], [11]。这些发现突显了长期生存的挑战，强调了进一步研究MMIHS发病机制的必要性。
近年来，随着遗传学研究的进展，已发现多个与平滑肌收缩功能相关的基因是MMIHS的致病因素，包括ACTG2、LMOD1、MYH11、MYL9、MYLK和PDCL3[12]。其中，平滑肌肌球蛋白重链11（MYH11）基因成为研究焦点，因为它编码平滑肌细胞收缩装置的主要成分——肌球蛋白重链蛋白，该蛋白在肌球蛋白II家族中形成六聚体平滑肌肌球蛋白复合体，对平滑肌收缩至关重要[13]。MYH11突变最初与胸主动脉夹层和动脉导管未闭相关，但最近的研究也表明它与MMIHS有关[13], [14]。MYH11突变会导致膀胱平滑肌组织收缩能力受损[8]。动物研究也证实了Myh11与MMIHS之间的关联[15]。然而，MYH11缺乏导致膀胱功能障碍的具体病理机制仍不清楚。本研究旨在构建Myh11敲除动物模型，以观察膀胱和肠道的表型变化，为MMIHS的发病机制提供新的见解。
章节片段
动物
使用CRISPR-Cas9基因编辑技术生成了Myh11杂合子敲除（KO）雄性小鼠及其野生型（WT）C57BL/6雄性同窝小鼠，来自Cyagen Biosciences（许可证号：SCXK (Su) 2018-0003）。所有动物均在特定无病原体（SPF）条件下饲养，处于温度控制的环境中（22–25 °C），光照/黑暗周期为12小时/12小时，并在整个研究过程中可自由获取标准饲料和无菌水。所有动物实验
生成Myh11+/-小鼠
对21天大小鼠的尾部提取的基因组DNA进行PCR分析以进行基因分型。琼脂糖凝胶电泳显示了野生型（Myh11+/+，489 bp）和杂合子（Myh11+/-，489/494 bp）等位基因的清晰条带（图1B）。与先前的报告一致[15]，靶向破坏Myh11等位基因会导致胚胎致死，因此本研究未获得纯合子小鼠。因此，使用杂合子Myh11+/-小鼠进行表型分析
讨论
本研究表明，Myh11的杂合子缺失足以在小鼠中诱导出与人类MMIHS相似的膀胱表型，包括巨膀胱和排尿功能障碍。这一发现建立了一个稳定且可重复的动物模型，用于探索MMIHS的病理生理机制。
Myh11的杂合子缺乏导致膀胱增大，伴随平滑肌层显著增厚
结论
我们提出了一个新型动物模型，能够忠实再现人类MMIHS的膀胱病理特征。我们的研究证实，Myh11单倍不足会破坏平滑肌表型并促进纤维化，从而损害膀胱结构和功能。这些发现定义了核心致病途径，并为开发针对MMIHS的疗法提供了重要框架。
人工智能辅助技术声明
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资助
本研究得到了内蒙古自治区科学技术项目（项目编号：2025KYPT0037）、内蒙古自治区自然科学基金（项目编号：2025MS08111）、内蒙古医科大学的重点项目（项目编号：YKD2022ZD018）以及内蒙古医科大学的科技创新团队项目（项目编号：无）的支持。
