基于表没食子儿茶素没食子酸酯与谷胱甘肽对黄曲霉毒素B1诱导的雏鸭亚急性肝损伤的保护作用研究，本研究提出一个更具概括性与吸引力的中文标题。 中文标题 表没食子儿茶素没食子酸酯与谷胱甘肽协同保护雏鸭对抗黄曲霉毒素B1肝毒性的作用与机制

《Poultry Science》：Hepatoprotective effects of epigallocatechin gallate and glutathione on aflatoxin B1-induced subacute liver injury in ducklings

为了探究缓解家禽黄曲霉毒素B1(AFB1)肝毒性的新策略，研究人员系统研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与谷胱甘肽(GSH)对AFB1诱导的雏鸭亚急性肝损伤的联合干预效果。结果表明，两者组合能通过调控AFB1代谢（如下调CYP450酶基因）、增强抗氧化能力（激活Keap1/Nrf2通路）、抑制线粒体凋亡和减轻肝纤维化，有效改善肝损伤，为开发新型保肝制剂提供了重要理论与应用依据。

　　

在畜牧养殖中，饲料安全是保障动物健康和生产效益的关键一环。然而，一种名为黄曲霉毒素B₁(Aflatoxin B₁, AFB₁)的剧毒物质，却广泛存在于玉米、花生等谷物及配合饲料中，成为威胁全球养殖业的隐形“杀手”。这种毒素不仅毒性强，还具有致癌性，而家禽，尤其是年幼的雏鸭，对其异常敏感。摄入被AFB₁污染的饲料后，雏鸭会出现生长迟缓、肝脏损伤等一系列问题，不仅造成经济损失，其毒素残留也可能通过食物链威胁人类健康。因此，寻找安全有效的策略来缓解AFB₁的毒性，具有重要的经济价值和公共卫生意义。

传统上，人们尝试过多种吸附剂或解毒剂，但效果有限或成本较高。近年来，天然产物因其来源广泛和潜在的低毒性受到关注。其中，茶叶中的主要活性成分——表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate, EGCG)，以其强大的抗氧化和抗炎特性而闻名。另一种物质，谷胱甘肽 (Glutathione, GSH)，则是体内最重要的内源性抗氧化剂之一，直接参与解毒过程。那么，这两种物质能否联手，为深受AFB₁之苦的雏鸭肝脏提供保护呢？它们的作用背后又隐藏着怎样的分子机制？为了回答这些问题，武汉市农业科学院畜牧兽医研究所等机构的研究团队在《Poultry Science》期刊上发表了一项深入研究。

研究者采用了系统性的动物实验与分子生物学技术相结合的方法。研究以一日龄雄性樱桃谷鸭为模型，将其分为对照组、AFB₁染毒组（基础日粮中添加80 μg/kg AFB₁）、以及三个干预组（在染毒基础上分别单独或联合添加400 mg/kg EGCG和/或120 mg/kg GSH），实验持续四周。关键的技术方法包括：通过检测血清生化指标（如ALT、AST）和肝脏指数评估肝功能；利用苏木精-伊红(H&E)染色和透射电镜(TEM)观察肝脏组织微观与超微结构；采用试剂盒测定肝脏氧化应激标志物（如MDA、SOD、GPX、GSH）含量与活性；通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和马松(Masson)染色分别检测肝细胞凋亡和肝脏纤维化程度；并运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析了一系列与AFB₁代谢、抗氧化防御、细胞凋亡及纤维化相关通路的关键基因表达水平。

研究结果揭示了EGCG和GSH多维度、协同的保护作用：

1. 生长性能、肝脏指数和血清生化

研究首先评估了AFB₁对雏鸭的整体影响。数据显示，AFB₁显著抑制了雏鸭在前两周的平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)，并提高了料重比(ADFI/ADG)。同时，AFB₁导致肝脏指数显著升高，血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性上升，而白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)水平下降，这些都明确指示了肝脏损伤和功能紊乱。值得注意的是，这些负面影响在实验第二周最为严重。而饮食中添加EGCG和GSH，尤其是两者联合使用，能有效逆转这些不利变化，改善生长性能，恢复肝功能指标，表明其对AFB₁的毒性具有缓解作用。

1暴露雏鸭生长性能（第1-2周和第3-4周）和肝损伤（第2周和第4周）的影响。(A–C) 分别为ADFI、ADG和ADFI/ADG的生长性能参数。(D) 肝脏指数（%）。(E–I) 血液血清AST、ALT、γ-GT、ALB和TP的水平。">

2. 肝脏的微观结构和超微结构

肝脏组织的病理学观察提供了直观证据。H&E染色显示，AFB₁组雏鸭肝细胞出现严重水肿、胞浆染色苍白、部分细胞坏死，并伴有局灶性纤维组织增生、胆管增生和胆汁淤积。透射电镜观察进一步发现，AFB₁组肝细胞核膜皱缩，线粒体肿胀、出现空泡化。而EGCG和GSH的干预，特别是联合使用，显著改善了这些组织结构异常，使细胞坏死减少，线粒体和细胞核结构基本恢复正常。

1亚急性暴露雏鸭肝脏微观和超微结构的影响（第2周）。(A) H&E染色。(B) TEM图像。">

3. EGCG和GSH减轻了AFB₁诱导的氧化损伤

氧化应激是AFB₁肝毒性的核心机制之一。研究发现，AFB₁显著提高了肝脏脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量，同时降低了抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性。EGCG和GSH的补充有效逆转了这些变化，增强了肝脏的抗氧化能力。在分子层面，AFB₁下调了核因子E2相关因子2 (Nrf2)及其下游抗氧化基因NADPH醌氧化还原酶1 (NQO1)和SOD1的表达，而上调了其负调控因子Keap1的表达。EGCG和GSH，尤其是联合应用，则能上调Nrf2、NQO1和SOD1的表达，表明其通过激活Keap1/Nrf2抗氧化信号通路来抵御氧化损伤。

1亚急性暴露雏鸭肝脏氧化损伤的影响（第2周）。">

4. 两相酶相关基因的相对mRNA表达

AFB₁在体内的毒性依赖于代谢激活。研究显示，AFB₁显著上调了肝脏中负责其活化的一相代谢酶基因（如CYP1A1、CYP1A2、CYP2A6）的表达，同时下调了负责解毒的二相代谢酶基因谷胱甘肽S-转移酶(GST)的表达。这可能导致更多有毒代谢物AFB₁-exo-8,9-epoxide (AFBO)的产生。EGCG和GSH干预后，一相代谢酶基因的表达被抑制，而GST基因的表达得以恢复，提示它们可能通过调控AFB₁的代谢过程，减少有毒产物的生成并促进其解毒排泄。

5. 肝细胞凋亡和线粒体功能相关基因的表达

TUNEL染色结果表明，AFB₁显著增加了肝细胞的凋亡率。基因表达分析发现，AFB₁上调了促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达，下调了抗凋亡基因Bcl-2的表达，激活了线粒体凋亡通路。同时，AFB₁还下调了与线粒体融合、生物合成及抗氧化相关的基因（如OPA1、PGC-1α、Trx2、Prx3）的表达。EGCG和GSH的补充有效降低了细胞凋亡率，并逆转了上述凋亡相关基因和部分线粒体功能基因的表达异常，表明其能通过保护线粒体功能和抑制凋亡通路来减轻肝细胞死亡。

1亚急性暴露雏鸭肝细胞凋亡和线粒体功能相关基因的影响（第2周）。(A) TUNEL染色。(B) 肝细胞凋亡率（%）。(C) 线粒体凋亡通路相关基因的相对mRNA表达。(D) 线粒体功能相关基因的相对mRNA表达。">

6. 胆汁酸代谢和肝脏纤维化

组织病理学观察到的胆管增生和胆汁淤积提示了胆汁酸代谢可能紊乱。血清学检测证实，AFB₁显著提高了总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)以及基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和MMP-9的水平。马松染色定量分析显示，AFB₁组肝脏纤维化面积比率显著增加。与此一致，纤维化关键通路TGF-β/Smads相关的基因（TGF-β1、Smad3、Col3a1、α-SMA、MMP-2、MMP-9）表达均被AFB₁上调。令人鼓舞的是，EGCG和GSH的干预，尤其是联合使用，能够显著降低这些血清指标、减少胶原纤维沉积、并下调纤维化相关基因的表达，从而有效缓解AFB₁诱导的胆汁淤积和肝纤维化进程。

1亚急性暴露雏鸭胆汁酸代谢和肝纤维化的影响（第2周）。(A–D) 雏鸭血清胆汁酸代谢相关指标。(E) 马松染色。(F) 肝脏纤维化面积比率（%）。(G) 肝纤维化中TGF-β/Smads通路相关基因的相对mRNA表达。">

研究结论与重要意义

综上所述，本研究系统证实了雏鸭对AFB₁的高度易感性，并揭示了AFB₁暴露会导致胆汁酸代谢紊乱和肝纤维化这一较新的肝损伤表现形式。更重要的是，研究首次在雏鸭模型中综合评估并阐明了EGCG和GSH（尤其是两者联用）对抗AFB₁肝毒性的多重保护机制：它们不仅通过抑制细胞色素P450 (CYP450)酶系来减少AFB₁有毒代谢物的生成，还通过激活Keap1/Nrf2信号通路增强肝脏的抗氧化防御能力；同时，通过调节Bcl-2家族蛋白表达来抑制线粒体途径的细胞凋亡，并通过干预TGF-β/Smads信号通路减轻肝纤维化的发展。这些作用共同改善了AFB₁引起的生长抑制、肝功能异常和组织结构损伤。

该研究的发现具有重要的理论和应用价值。在理论层面，它深化了对AFB₁致肝损伤多维度机制的理解，特别是补充了其对胆汁酸代谢和纤维化影响的认识，并明确了EGCG和GSH通过多靶点、多通路发挥协同保肝作用的分子基础。在实际应用层面，这项研究为开发基于EGCG和GSH的新型饲料添加剂或保肝药物提供了坚实的实验依据和潜在的药物作用靶点，为解决畜牧业中AFB₁污染这一全球性难题提供了一种天然、有效且可能具有协同增效作用的解决方案，对保障动物健康、提高养殖效益和食品安全具有重要意义。