利用实时PCR技术快速诊断术中生长激素分泌型垂体神经内分泌肿瘤的边界

《Acta Neuropathologica Communications》：Rapid intraoperative boundary diagnosis of somatotroph pituitary neuroendocrine tumors using real-time PCR

实时PCR技术用于术中垂体生长激素瘤分子边界诊断，通过检测GNAS R201C突变提高手术精准度，避免过度切除或残留，验证了该技术的高灵敏度和特异性，并证实其与数字PCR结果一致，为神经内分泌瘤治疗提供新方法

　　

摘要

垂体神经内分泌肿瘤（PitNETs）通常为良性肿瘤；然而，功能性亚型会导致激素分泌过多，从而引发全身性并发症。在生长激素分泌型PitNETs中，生长激素（GH）的过量分泌会增加死亡率，因此需要完全切除肿瘤以实现内分泌学缓解。虽然沿假包膜进行囊外切除是首选方法，但由于肿瘤细胞可能浸润邻近的正常组织，导致包膜边界难以明确界定，从而需要进一步切除外层组织。相反，过度切除会增加术后垂体功能减退的风险；因此，精确地界定肿瘤边界在手术过程中至关重要。大约一半的生长激素分泌型PitNETs携带GNAS突变。我们使用了一种微流控实时PCR平台（GeneSoC^?），该平台可在约15分钟内检测出突变，用于手术中的分子边界诊断。首先，我们使用Sanger测序方法分析了存档的冷冻样本，在24个样本中发现了11个样本（45.8%）携带GNAS R201C突变，未检测到其他点突变。在利用Sanger验证的样本优化实时PCR技术后，我们构建了具有明确变异等位基因频率（VAFs）的质粒以确认检测准确性。实时PCR在该队列中的灵敏度和特异性均为1.000，荧光强度阈值设为40，能够可靠地检测到变异频率≥2%的突变。对5例GNAS R201C阳性患者的多个手术部位（共23个样本）进行分析，结果显示实时PCR结果与滴液数字PCR结果一致。值得注意的是，即使在组织病理学上无法明确识别肿瘤细胞的部位，也检测到了突变。所有患者均实现了肿瘤的完全切除，并且垂体功能得到保留。这些发现表明，实时PCR为生长激素分泌型PitNETs的手术中分子边界诊断提供了一种快速、客观的方法，有助于安全、彻底地切除肿瘤，也可能适用于其他携带可检测遗传突变的肿瘤。