由Enterococcus hirae IDO5介导的新的粪臭素降解代谢途径及其在猪粪废水处理中的应用

【字体: 时间:2026年02月25日 来源:Journal of Hazardous Materials 11.3

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  色氨酸降解|Enterococcus hirae|冻干粉末|代谢途径|生物脱臭

  
林彦志|刘彦辰|马贤勇|于淼|崔一燕|翁光英|余静|荣婷|刘志昌|邓敦|宋敏
广东省农业科学院动物科学研究所,国家生猪与家禽育种产业重点实验室,农业农村部华南动物营养与饲料科学重点实验室,广东省动物育种与营养重点实验室,广东省动物肉品质量安全控制与评价工程技术研究中心,广州,510640,中国

摘要

集中型动物饲养场会产生大量的粪便废水,导致恶臭气体的排放和环境问题。粪便废水中的主要恶臭化合物——粪臭素具有生物毒性和环境持久性,对生态系统和人类健康构成威胁。应用能够降解粪臭素的细菌是一种有前景的绿色技术。然而,其实际应用受到菌株在真实粪便废水中的降解效果有限以及储存和应用问题的限制。从猪粪便中分离出的Enterococcus hirae IDO5菌株首次被证明能够在猪粪便废水中有效降解粪臭素。转录组学、代谢组学和分子对接分析表明,IDO5介导的粪臭素降解主要通过一种新的苯丙氨酸–乙酰苯酮–苯乙醛–苯乙酸代谢途径进行,该途径受黄素细胞色素c和adhE的调控。黄素细胞色素c可能是催化粪臭素初始修饰反应的关键酶,而adhE可能负责中间产物的进一步转化。此外,成功制备了一种高活性的IDO5冻干粉(IDO5LP),在猪粪便废水中表现出对粪臭素、吲哚和氨的有效降解能力。16S rDNA检测结果显示,在施用IDO5LP后,IDO5能够在猪粪便废水中存活并定植。除了直接降解粪臭素外,IDO5还抑制了产生粪臭素的细菌(如Megasphaera elsdenii)的生长,从而短期内改变了微生物群落,减少了粪臭素的产生。这些发现为改进动物废物管理提供了宝贵的生物学解决方案。

引言

全球对动物蛋白需求的迅速增长推动了大规模和集约化畜牧业的快速发展。这种集中型动物饲养方式导致在相对封闭的养殖区域内产生和积聚了大量粪便和废水[1]。混合后,新鲜猪粪便废水会因酶的产生(如氨)和高浓度挥发性有机化合物的挥发而产生恶臭[2],[3]。这些物质在封闭养殖区域内的积累严重降低了空气质量,并因对附近居民的影响引发了社区投诉[4]。
在中国,畜牧业主要以养猪为主,猪粪便废水会释放多种恶臭物质,包括挥发性硫化合物(VSCs)、酚类化合物、吲哚和粪臭素[5],[6],[7]。尽管VSCs和酚类化合物通常被认为是主要的气味来源,但粪臭素对猪粪便刺鼻特有气味的贡献往往被低估[6],[8],[9]。粪臭素的气味检测阈值最低(< 0.00309 mg/m3),赋予了猪粪便独特的强烈粪便气味,这种气味在其他牲畜或工业废水中并不常见[3],[5],[9],[10]。利用气味活性值(OAVs)的研究表明,在新鲜猪粪便废水(通常含有5.0 - 10.6 mg/L的粪臭素)中,粪臭素是主要的气味来源[6],[11]。其OAV比VSCs和酚类化合物高出数十到数百倍,使其成为这一关键阶段周围环境中刺鼻气味的主要贡献者[6],[11],[12]。此外,粪臭素容易吸附在颗粒物上,导致持续的环境污染[13]。除了恶臭外,粪臭素还带来重大的生态和健康威胁。它还会促使蚊子聚集和产卵,从而促进疾病传播,并可能增加猪粪便废水中的抗生素抗性基因(ARGs)的数量[14],[15],[16]。在反刍动物中,粪臭素会引起严重的肺部和血液系统疾病(如水肿、溶血),影响生长[17],[18]。长期暴露于粪臭素还可能对人类健康产生不良影响,包括头痛、恶心和烦躁,甚至有肺部损伤的风险[19],[20],[21]。鉴于其持久性和生物毒性,有效去除粪臭素对于可持续的畜牧业、环境安全和公共卫生至关重要。
先前的研究表明,光催化降解、臭氧氧化、芬顿反应等物理和化学方法可以通过在溶剂中生成高氧化性的羟基自由基来有效降解粪臭素。然而,尽管这些方法具有较高的去除效率,但所使用的催化剂通常寿命较短,在运行过程中消耗大量能量,并且副产品的毒性令人担忧[22],[23]。因此,它们的实际应用面临挑战[24],[25],[26]。相比之下,生物降解已被证明是一种有效的污染物矿化方法,具有成本效益高、操作简单且不会产生二次污染等优点,从而成为环境修复的有希望的策略[27]。多种细菌属,包括乳酸菌假单胞菌红球菌Cupriavidus鲍曼不动杆菌,已被证明可以降解粪臭素,其降解效率和代谢途径也已被研究[28],[29],[30],[31],[32]。然而,这些细菌在实际粪便废水中的高效应用仍受到多种技术挑战的限制。粪便废水中的许多因素,尤其是原有的微生物群落,会对增强菌株的降解性能产生显著影响;在某些情况下,增强菌株甚至可能无法在复杂的微生物群落中成功定植[33]。迄今为止,只有一项研究记录了Acinetobacter toweneri NTA1-2A和Acinetobacter guillouiae TAT1-6A在禽类垫料中去除粪臭素的应用[34],关于相关微生物群落的信息有限。另一方面,对于大规模猪粪便废水的实际处理来说,开发具有优异运输性和长期储存稳定性的微生物产品至关重要。固态微生物制剂(特别是通过真空冻干技术制备的制剂)提供了一种有前景的解决方案,具有低包装成本、方便运输和优异的细菌存活率保持能力。这些特点使得冻干制剂广泛适用于保存多种微生物,包括细菌和酵母[35]。因此,识别能够在猪粪便废水复杂环境中存活和繁殖的高效降解气味细菌菌株,并将其开发成高效且生物安全的新型制剂,是当前研究的迫切和关键目标。
此前,我们从猪粪便中分离出了E. hirae IDO5菌株,该菌株表现出显著的吲哚降解效率和广泛的恶臭物质(如酚类和粪臭素)代谢能力[36],[37]。随着研究的深入,我们发现IDO5在降解粪臭素方面也表现出显著效果。尽管Enterococcus是动物体内的常见肠道细菌[38],[39],但迄今为止尚未有研究报道其降解粪臭素的能力。因此,本研究的目标是:(1)通过代谢组和转录组阐明粪臭素降解的潜在机制;(2)通过正交试验确定冻干粉的最佳配方;(3)通过粪臭素降解测试和微生物组学研究,明确IDO5冻干粉对猪粪便废水的短期影响。这些发现为未来开发经济高效且可持续的生物粪臭素去除方法提供了理论基础,通过使用安全、易于培养和高效细菌菌株来实现。

菌株、培养基和试剂

Enterococcus hirae IDO5是从猪粪便中分离出来的,并保存在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC),保藏编号为GDMCC No. 64457。粪臭素(3-甲基吲哚,纯度≥98%)购自Sigma-Aldrich(美国密苏里州路易斯)。本研究中使用的其他化学试剂和溶剂均为市售产品。Luria-Bertani(LB)培养基用于培养菌株,其组成如下(1 L):10.0 g色氨酸、5.0 g酵母提取物和10.0 g...

粪臭素降解菌Enterococcus hirae IDO5在猪粪便废水中的表现

在之前的研究中,Enterococcus hirae IDO5在含有100 mg/kg粪臭素-MSM的培养基中24小时内能够降解70%的粪臭素[36]。然而,猪粪便废水中的化学成分和微生物成分的复杂性可能导致菌株的降解性能存在较大差异。因此,为了评估其在实际环境中的效果,我们评估了该菌株在真实猪粪便废水中的表现。如图1所示,在...

讨论

在畜牧业环境中安全有效地降解粪臭素长期以来一直是一个重大挑战。由于传统的物理和化学方法去除粪臭素的成本较高,这些方法正逐渐被微生物和酶降解技术所取代。尽管已经分离出多种能够降解粪臭素的细菌菌株,但它们在实际环境条件下的降解效率可能无法保持

结论

本研究首次证明了Enterococcus hirae IDO5在猪粪便废水中的粪臭素降解作用,揭示了降解途径及其关键酶。除了常见的粪臭素-2-氨基乙酰苯酮-N-甲酰邻氨基苯甲酸途径外,IDO5主要通过粪臭素–苯丙氨酸–乙酰苯酮–苯乙醛–苯乙酸途径降解粪臭素,这代表了一种新的粪臭素生物降解机制。此外,我们还发现了黄素细胞色素...

环境影响

粪臭素是一种常见的牲畜废水中的恶臭化合物,严重影响空气质量与公共健康。虽然微生物可以降解它,但高效的实际降解仍然具有挑战性。在本研究中,Enterococcus IDO5在猪粪便废水中表现出高效的粪臭素降解能力。在此过程中,我们发现了一种新的粪臭素代谢途径,涉及苯丙氨酸–乙酰苯酮–苯乙醛–苯乙酸代谢,阐明了其中的关键作用...

CRediT作者贡献声明

刘彦辰:软件、方法论、研究。林彦志:撰写 – 原稿撰写、方法论、研究、数据分析。于淼:监督、资源提供、研究。马贤勇:监督、资源提供、研究、资金获取。翁光英:方法论、数据分析。崔一燕:方法论、数据分析。荣婷:方法论、数据分析。余静:数据分析。邓敦:撰写 – 审稿与编辑、资源提供、方法论

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

本研究得到了广州市科学技术计划(2023B03J1368)、广东省自然科学基金(2023A1515012064, 2022A1515140025)、广东省动物育种与营养重点实验室开放项目(2022SZ04)、国家自然科学基金(32302835)、广东省低碳农业与碳中和研究中心(XTXM202204A)以及广东省乡村振兴战略专项基金(2023KJ465)的支持
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