《Cellular and Molecular Life Sciences》：TRIM26-mediated regulation of TRAF6 ubiquitination enhances host immune response during Toxoplasma gondii infection
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针对弓形虫感染免疫机制不清、有效防治手段匮乏的问题，本研究聚焦于三基序蛋白26（TRIM26）如何通过调控肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的K48型泛素化，从而激活NF-κB信号通路、促进炎症因子（如IL-12, IFN-γ）表达，增强宿主抗弓形虫免疫应答。研究证实TRIM26是关键正调控因子，其缺失会削弱免疫、加重感染，为弓形虫病的防治提供了新思路和新靶点。
解开免疫防御的钥匙：一种新蛋白如何帮助身体对抗“隐形杀手”弓形虫
在我们的身边，潜伏着一种名为刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）的“隐形杀手”。它是一种机会性致病原虫，能够感染几乎所有的温血动物，包括人类。据统计，全球约有三分之一的人口携带这种寄生虫。对于大多数免疫力正常的人而言，感染可能悄无声息，甚至毫无症状；但对于免疫力低下的人群，如艾滋病患者、癌症病人或器官移植接受者，弓形虫感染可能引发致命的弓形虫病。目前，临床上缺乏有效的疫苗，而常用药物存在副作用和耐药性问题。因此，深入理解宿主如何抵抗弓形虫感染，寻找新的免疫调控靶点，成为战胜这一寄生虫的关键。
免疫系统的第一道防线——天然免疫，在对抗弓形虫入侵中扮演着核心角色。在这个过程中，一个名为肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的接头蛋白至关重要。它像是一个信号放大器，能够激活下游的NF-κB等信号通路，驱动白介素-12（IL-12）、干扰素-γ（IFN-γ）等关键炎症因子的产生，这些因子对于清除寄生虫必不可少。有趣的是，弓形虫本身也会“耍花招”，其分泌的效应蛋白如GRA15会与TRAF6相互作用，试图操控宿主的免疫反应以利于自身生存。这表明TRAF6是病原体与宿主博弈的焦点，但宿主细胞内如何精细调控TRAF6的活性，尤其是在弓形虫感染背景下，仍是一个待解的谜团。
一项发表在《Cellular and Molecular Life Sciences》上的研究，为我们揭开了这个谜团的一角。研究人员将目光投向了一个名为TRIM26（三基序蛋白26）的蛋白质。TRIM家族蛋白通常扮演“分子标签工”（E3泛素连接酶）的角色，通过给其他蛋白添加泛素“标签”来调节其功能或命运。那么，TRIM26是否也与TRAF6有关？它在弓形虫感染这场攻防战中又起着什么作用呢？
为了回答这些问题，研究人员运用了一系列细胞与动物实验技术。他们使用了从野生型（WT）和Trim26基因敲除（Trim26?/?）小鼠分离的骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）以及BV2小胶质细胞系进行体外感染实验。通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）、实时定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了蛋白表达、基因转录和细胞因子分泌水平。为了探究蛋白质间的直接相互作用，他们采用了免疫共沉淀（Co-IP）和免疫荧光共定位技术。为了阐明TRIM26对TRAF6的调控机制，研究人员在HEK293T细胞中进行了过表达和泛素化分析实验，利用了一系列特异的泛素突变体（如K48、K63等）来鉴定泛素链连接类型。此外，研究还通过构建Trim26?/?小鼠模型，在体内评估了TRIM26缺失对弓形虫感染后小鼠存活率、脏器寄生虫负荷、组织病理损伤以及免疫细胞（如T细胞、巨噬细胞）比例的影响，相关分析采用了流式细胞术、组织切片H&E染色和绝对定量PCR等方法。
研究结果揭示了TRIM26在抗弓形虫免疫中的全新角色：
1. T. gondii感染下调TRAF6表达
研究人员发现，用弓形虫RH株感染小鼠巨噬细胞后，TRAF6的蛋白和mRNA水平呈时间依赖性下降，而关键的免疫因子IL-12的表达则显著上调。这提示TRAF6参与了宿主的抗弓形虫免疫反应，但其表达受到了动态调控。
2. TRIM26与TRAF6结合
为了寻找调控TRAF6的“伙伴”，研究人员通过免疫沉淀结合质谱分析，筛选出多个候选蛋白。进一步的免疫共沉淀实验确认，TRIM26能够特异性与TRAF6结合，并且这种结合在内源性条件下也存在。免疫荧光实验直观地显示两者在细胞内共定位。
3. TRIM26减弱TRAF6的K48连接型多聚泛素化
TRIM26通常被认为是E3泛素连接酶，但本研究得到了一个意外的发现。当过表达TRIM26时，TRAF6的总泛素化水平降低了。更深入的分析表明，TRIM26 specifically attenuated K48-linked polyubiquitination of TRAF6，而对其他类型（如K63连接）的泛素化没有影响。K48连接的泛素化通常标记蛋白质，使其被蛋白酶体降解。因此，TRIM26的作用可能是通过减少TRAF6的K48泛素化来稳定TRAF6蛋白。
4. TRIM26正向调控NF-κB信号通路并促进炎症细胞因子产生
在弓形虫感染过程中，巨噬细胞内的TRIM26表达量随时间推移而上调。当比较野生型和Trim26?/?巨噬细胞时，发现TRIM26缺失导致NF-κB信号通路关键分子（如p65、IκBα、TAK1、IKKα/β）的磷酸化水平降低，p65的核转位减少。相应地，感染弓形虫后，Trim26?/?巨噬细胞产生的IL-12、IFN-γ和TNF-α等炎症因子显著低于野生型细胞。
5. TRIM26对于宿主抗T. gondii免疫反应和控制寄生虫扩增至关重要
动物实验证实了TRIM26的关键作用。与野生型小鼠相比，Trim26?/?小鼠感染弓形虫后：
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脾脏中的CD4+和CD8+T细胞比例，以及腹水中的巨噬细胞和炎症单核细胞比例均显著降低。
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肝脏、脾脏和肾脏中的寄生虫负荷明显更高。
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肝、肾组织出现更严重的病理损伤。
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在面对毒力较弱的ME49株攻击时，生存率显著下降。
这些结果表明，TRIM26的缺失削弱了宿主的整体免疫应答能力，导致无法有效控制寄生虫的增殖和扩散，从而加重了疾病。
结论与意义：
本研究系统阐明了TRIM26在宿主抗弓形虫免疫中的关键作用及其分子机制。核心结论是：在弓形虫感染过程中，TRIM26通过直接结合TRAF6，特异性减弱其K48连接的多聚泛素化，从而稳定TRAF6蛋白水平。稳定的TRAF6进而更有效地激活下游的NF-κB信号通路，促进IL-12、IFN-γ等关键促炎细胞因子的产生，最终增强宿主的免疫防御能力，有效控制寄生虫感染。TRIM26基因敲除小鼠所表现出的免疫细胞比例失调、细胞因子分泌不足、寄生虫负荷升高以及生存率下降等现象，均反向验证了这一正调控通路的重要性。
这项研究的突破性意义在于：
首先，它发现了TRIM26是TRAF6的一个新型调控因子，并揭示了其通过调控K48泛素化来稳定TRAF6的独特机制，这丰富了我们对TRAF6翻译后修饰调控网络的认识。通常作为E3泛素连接酶的TRIM26，在此展现了其可能作为“去泛素化”调控者的复杂功能，挑战了对其角色的传统认知。
其次，研究首次将TRIM26置于抗弓形虫免疫的上下文中，明确了其在宿主防御该寄生虫感染中的不可或缺性，将TRIM26的功能从已知的抗病毒、肿瘤等领域拓展至抗寄生虫免疫。
最终，这项工作为弓形虫病的防治提供了新的潜在靶点。TRIM26-TRAF6轴作为增强宿主免疫力的一个内源性调控环节，其激活可能成为开发新型免疫调节疗法或辅助治疗策略的理论基础。通过靶向这一通路，或许能帮助免疫力低下的人群更好地抵抗弓形虫感染，具有重要的转化医学价值。
