SIRT1通过降低DDX5的Neddylation修饰，从而减轻心肌缺血/再灌注损伤

《Human Cell》：SIRT1 reduced DDX5 neddylation to attenuate myocardial ischemia/reperfusion injury

心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）中SIRT1通过抑制DDX5的NEDD8修饰减轻细胞凋亡和氧化应激。体外实验显示MLN4924（NEDD8激活酶抑制剂）逆转H/R诱导的NEDD8共价蛋白升高及SIRT1蛋白水平下降，并鉴定DDX5为NEDD8修饰底物。H/R减少DDX5蛋白并增加其NEDDylation，被MLN4924或LV-SIRT1逆转。SIRT1通过抑制DDX5的NEDDylation增强其稳定性，降低细胞凋亡和ROS水平。体内实验证实，LV-DDX5可逆转MI/RI小鼠的心肌梗死面积和细胞凋亡。结论表明SIRT1通过抑制DDX5的NEDDylation减轻MI/RI，为治疗提供新靶点。

　　

摘要

背景

SIRT1在心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）中表现出保护作用，但其相关机制尚不清楚。本研究探讨了SIRT1对MI/RI过程中NEDD8修饰的调控作用。

方法

通过缺氧和再氧合（H/R）处理H9C2细胞来模拟体外MI/RI模型，并使用C57BL6小鼠建立体内MI/RI模型。采用质谱分析法筛选NEDD8可能的修饰底物；通过Western blot检测蛋白质水平；使用CCK8评估细胞活力；通过流式细胞术、TUNEL染色和心肌肌钙蛋白T（cTNT）双染色检测心肌细胞凋亡；分别使用TTC染色和HE染色评估MI/RI小鼠的心肌梗死面积和心脏组织的病理变化。

结果

MLN4924（一种NEDD8激活酶（NAE）抑制剂）显著降低了H/R处理引起的NEDD8结合蛋白水平升高（p < 0.001）以及SIRT1蛋白水平降低（p < 0.001）。通过质谱分析发现Dead-box helicase 5（DDX5）可能是NEDD8的修饰底物。H/R处理进一步降低了H9C2细胞中的DDX5蛋白水平（p < 0.001）并增加了DDX5的NEDD8修饰，而这一现象可被MLN4924或LV-SIRT1逆转（p < 0.05）。此外，SIRT1通过减少DDX5的NEDD8修饰来增强其稳定性，从而提高DDX5蛋白水平。功能实验表明，缺氧处理降低了H9C2细胞的活力（p < 0.001）、增加了细胞凋亡（p < 0.001）和活性氧（ROS）水平（p < 0.001），而这些变化均可被LV-SIRT1（p < 0.05, p < 0.001）或LV-DDX5（p < 0.05, p < 0.001）逆转。体内实验显示，LV-DDX5可逆转MI/RI小鼠的心肌梗死面积增加（p < 0.05）、坏死心肌纤维增多以及心肌细胞凋亡（p < 0.001）。

结论

这些结果表明，SIRT1通过抑制DDX5的NEDD8修饰来提高DDX5蛋白水平，从而减少心肌细胞凋亡和ROS水平，进而缓解MI/RI损伤。

背景

SIRT1在心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）中表现出保护作用，但其相关机制仍不明确。本研究探讨了SIRT1对MI/RI过程中NEDD8修饰的调控作用。

方法

通过缺氧和再氧合（H/R）处理H9C2细胞来模拟体外MI/RI模型，并使用C57BL6小鼠建立体内MI/RI模型。采用质谱分析法筛选NEDD8可能的修饰底物；通过Western blot检测蛋白质水平；使用CCK8评估细胞活力；通过流式细胞术、TUNEL染色和心肌肌钙蛋白T（cTNT）双染色检测心肌细胞凋亡；分别使用TTC染色和HE染色评估MI/RI小鼠的心肌梗死面积和心脏组织的病理变化。

结果

MLN4924（一种NEDD8激活酶（NAE）抑制剂）显著降低了H/R处理引起的NEDD8结合蛋白水平升高（p < 0.001）以及SIRT1蛋白水平降低（p < 0.001）。通过质谱分析发现Dead-box helicase 5（DDX5）可能是NEDD8的修饰底物。H/R处理进一步降低了H9C2细胞中的DDX5蛋白水平（p < 0.001）并增加了DDX5的NEDD8修饰，而这一现象可被MLN4924或LV-SIRT1逆转（p < 0.05）。此外，SIRT1通过减少DDX5的NEDD8修饰来增强其稳定性，从而提高DDX5蛋白水平。功能实验表明，缺氧处理降低了H9C2细胞的活力（p < 0.001）、增加了细胞凋亡（p < 0.001）和活性氧（ROS）水平（p < 0.001），而这些变化均可被LV-SIRT1（p < 0.05, p < 0.001）或LV-DDX5（p < 0.05, p < 0.001）逆转。体内实验显示，LV-DDX5可逆转MI/RI小鼠的心肌梗死面积增加（p < 0.05）、坏死心肌纤维增多以及心肌细胞凋亡（p < 0.001）。

结论

这些结果表明，SIRT1通过抑制DDX5的NEDD8修饰来提高DDX5蛋白水平，从而减少心肌细胞凋亡和ROS水平，进而缓解MI/RI损伤。