《Advanced Science》：SR-B1-Mediated Transplacental Transfer of Hydrophobic Toxicants Disrupts Fetal Development During Barriergenesis
引言
妊娠期是胎儿发育的关键窗口，其生物稳态易受外源物（xenobiotics）的干扰。健康与疾病的发育起源（Developmental Origins of Health and Disease， DOHaD）假说认为，子宫内敏感期的环境暴露可导致婴儿期至成年期的慢性健康问题。疏水性持久性有机污染物（persistent organic pollutants, POPs）在母体、胎盘和胎儿血液中的全球性检出，凸显了其母胎转移和潜在的发育风险。阐明这些疏水性外源物的关键暴露窗口和转运机制，对于理解其发育影响和潜在致病通路至关重要。胎盘作为母体组织和发育胚胎之间的关键界面，具有显著的细胞异质性，并在整个妊娠期间经历重大的分子和组织学转变。然而，大多数母婴转移研究主要集中在分娩时或接近分娩时母体和胎儿样本的比较分析，以评估外源物的跨胎盘转移。关于不同妊娠阶段外源物和结构分子的动态变化，以及化学物质在胎盘组织内积累的数据仍然存在重大知识缺口。
结果
2.1 发育中的胎盘和胎儿的疏水性MCCPs时空异质性
本研究首先开发了一种质谱成像（mass spectrometry imaging， MSI）方法——氯化四苯基鏽（Ph4PCl）增强的电离耦合气流辅助电离（air flow-assisted ionization, AFAI）-轨道阱质谱，可在喷洒溶剂中加入PhPCl，同时可视化多卤代外源物和内源代谢物的空间分布。通过该方法研究疏水性中链氯化石蜡（medium-chain chlorinated paraffins, MCCPs）的跨胎盘转移。所有MCCPs同系物在发育中的胎盘内均表现出显著的空间异质性，在蜕膜区（decidual zone, DZ）、连接区（junctional zone, JZ）和迷路区（labyrinth zone, LZ）具有不同的分布模式。在E10.5-E12.5期间，MCCPs强度在LZ最高，其次是JZ和DZ。然而，在E13.5之后发生了显著转变：DZ积累的MCCPs强度最高，超过了LZ和JZ。这种模式从E14.5持续到E16.5。到晚孕晚期（E17.5–E18.5），MCCPs的分布模式与早期阶段（E10.5–E12.5）完全相反。这些结果揭示了MCCPs在胎盘内动态且受时间调控的空间分布模式，表明这些区域在转运和积累所有MCCPs同系物方面具有阶段特异性作用。
MCCPs在胎儿组织中的空间分布也在每个发育阶段（对应胎盘的E10.5-E18.5）进行了成像。在所有检测阶段，胎儿肝脏（fetal liver, FL）始终观察到最高的MCCPs强度。相对较高的MCCPs强度在早期发育（E10.5–E13.5）期间检测到在中枢神经系统（central nervous system, CNS）组织中。相反，在后期阶段（E14.5–E18.5），较低的MCCPs强度分布到其他组织。
MCCPs在DZ、JZ、LZ和FL中从E10.5到E18.5的动态趋势被进一步分析。DZ中的MCCPs强度在整个妊娠期间呈现持续增加趋势。相比之下，JZ和LZ中的MCCPs强度在E12.5达到峰值，随后显著下降。值得注意的是，LZ中的MCCPs强度从E12.5急剧下降到E18.5，降低到峰值强度的约0.03倍，表明最大暴露发生在胎盘屏障完全形成之前。相应地，FL中的MCCPs强度在E15.5达到最大，比胎盘LZ的峰值滞后三天，到E18.5时下降到峰值强度的0.07倍。此外，MCCPs在胎鼠CNS中的强度在E13.5达到峰值，随后迅速下降。据我们所知，这是首次将外源物的跨胎盘转移在发育中的胎盘和胎儿中可视化，突出了E10.5至E12.5时期是妊娠期间意外高暴露MCCPs的关键窗口。
2.2 疏水性毒物与内源性脂质在胎盘中的空间共定位
本研究进一步利用Ph4PCl增强的AFAI-MSI同时成像多卤代外源物和内源代谢物的能力，对胎盘中的内源代谢物进行了成像。显著的是，与未添加Ph4PCl的分析相比，Ph4PCl增强的电离将单酰基甘油（monoacylglycerol, MG）、二酰基甘油（diacylglycerol, DG）和神经酰胺（ceramide, Cer）在小鼠脑切片中的分析灵敏度分别提高了约1.73–2.50倍、6.62–8.83倍和2.41–11.76倍。胎盘中的内源性脂质（例如磷脂酰乙醇胺 [phosphatidylethanolamine， PE]、DG和脂肪酸 [fatty acid， FA]）在E10.5–E14.5期间也表现出与MCCPs相似的时空异质性，在LZ中观察到显著较高的强度。在E16.5–E18.5期间，这些脂质的空间异质性消失。
研究聚焦于E11.5和E17.5两个关键时间点，因为MCCPs在胎盘中的分布在这两个阶段表现出完全相反的模式。小鼠暴露于低剂量（MCCPs-L）和高剂量（MCCPs-H）的MCCPs，并在E11.5和E17.5收集胎盘和胎儿组织进行成像分析。在E11.5，两个剂量组中MCCPs的强度均在胎盘LZ中始终显著较高，其次是JZ和DZ。空间代谢组学分析揭示，在E11.5，疏水性脂质，包括甘油三酯（triglycerides， TG）、Cer、FA、PE和胆固醇，也在LZ表现出最高强度，与MCCPs在此阶段的分布模式一致。但亲水性代谢物如甜菜碱、牛磺酸和丙氨酸在胎盘中呈现均匀分布，没有空间异质性。相反，MCCPs的这种分布模式在E17.5被完全逆转。在此阶段，除了胆固醇外，脂质和极性代谢物在胎盘中均未表现出显著的空间异质性。胆固醇的强度在DZ显著高于LZ，其分布模式与MCCPs一致。重要的是，胎盘中可视化内源代谢物的空间分布不受MCCPs暴露的影响，在暴露组和对照组中显示出相似的模式。这些发现表明，内源性脂质和疏水性外源物在E11.5被共同转运通过LZ到胎儿，然而，一旦胎盘屏障在E17.5建立，MCCPs的转运受到显著阻碍，可能与胆固醇在此后期阶段共享共同通路。
这一观察得到了另一种疏水性外源物——六溴环十二烷（hexabromocyclododecane， HBCD，一种溴化阻燃剂）的跨胎盘分布模式的支持。在E11.5，HBCD在两个剂量组的胎盘LZ中积累水平高于JZ和DZ，但在E17.5，这种模式完全逆转——这与MCCPs观察到的现象类似。值得注意的是，HBCD的分布模式与脂质相似，但与E11.5胎盘中的极性代谢物不同，而在E17.5，它们仅与胆固醇相似。疏水性模型化合物（MCCPs和HBCD）的相似现象表明，疏水性外源物可能在早孕期间构成显著的胎儿暴露风险，因为它们可以在胎盘屏障形成期间与内源性脂质共同转运到发育中的胎儿。
2.3 介导胎盘转运疏水性外源物和脂质的蛋白质的鉴定
为了识别导致疏水性外源物在胎盘空间异质性的蛋白质，本研究重新分析了一个最近发表的小鼠胎盘LZ发育的单核RNA测序（single-nucleus RNA sequencing, snRNA-seq）数据集。鉴于滋养层细胞是胎盘特异性细胞，负责大多数胎盘功能，研究通过t分布随机邻域嵌入（t-distributed stochastic neighbor embedding, t-SNE）分析，从原始数据集中聚焦于16，386个滋养层细胞核。t-SNE分析揭示了LZ中的四个不同的滋养层亚群：迷路滋养层祖细胞（labyrinth trophoblast progenitors, LaTP）、合体滋养层细胞（syncytiotrophoblasts， SynTI和SynTII）和窦状滋养层巨细胞（sinusoidal trophoblast giant cells, S-TGC）；以及JZ中的三个亚群：连接区前体细胞（junctional zone precursors， JZP）、糖原细胞（glycogen cells, GC）和海绵滋养层细胞（spongiotrophoblasts， SpT）。这些数据进一步按妊娠时间点分开以研究发育动态。LaTP群体表现出快速的发育下降，到E14.5时几乎检测不到。相反，终末分化细胞群体（SynTI, SynTII和S-TGC）显示出显著扩张。各细胞群在妊娠时间点的量化揭示了胎盘发育（E9.5–E14.5）期间祖细胞（LaTP）和分化细胞群（SynTI， SynTII和S-TGC）之间的反向关系。当LaTP逐渐减少时，它们的分化后代（SynTI, SynTII和S-TGC）经历了实质性增加。值得注意的是，母胎血液屏障由三层滋养层细胞组成：SynTII， SynTI和S-TGC。因此，介导疏水性毒物（例如MCCPs或HBCD）和内源性脂质在LZ差异积累（E11.5高，E14.5后低）的候选蛋白，应该在LaTP细胞中高表达，而在SynTI， SynTII或S-TGC群体中低表达。使用这些标准，本研究初步筛选了50个脂质相关候选物，并基于t-SNE投影相似性将选择范围缩小到7个蛋白。其中，只有清道夫受体B类成员1（Scavenger Receptor Class B Member 1， SR-B1）具有已知的通过与高密度脂蛋白（high-density lipoprotein， HDL）相互作用来转运脂质（特别是胆固醇）的作用。其在滋养层亚群中跨越t-SNE空间的表达与预期的差异趋势一致，支持其在疏水性化合物的早期胎盘转运中的潜在作用。
为了验证Scarb1在胎盘中的空间表达模式，本研究首先利用空间时间分辨转录组图谱工具（Spatiotemporally-resolved Transcriptome Atlas of Mouse Placenta, STAMP）来可视化Scarb1在发育中胎盘（E9.5-E16.5）的时空分布，这与内源性脂质的分布相似。研究进一步对E11.5和E17.5的石蜡包埋胎盘切片进行了免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）染色。SR-B1表现出主要的膜相关定位。在E11.5，SR-B1在LZ的表达显著高于DZ和JZ，与此阶段在LZ观察到的疏水性外源物（例如MCCPs或HBCD）和内源性脂质水平升高一致。在E17.5，SR-B1在DZ和JZ中表达极低，可能限制了疏水性外源物和胆固醇从DZ向LZ的易位。在E17.5的LZ检测到的相对较高的SR-B1表达主要归因于其在SynTII亚群中的表达。此外，本研究评估了可能介导外源物和脂质母体转移的其他蛋白质的表达，例如转甲状腺素蛋白（transthyretin， TTR）和微粒体甘油三酯转移蛋白（microsomal triglyceride transfer protein， MTTP）。t-SNE投影显示Ttr和Mttp在所有滋养层簇中的表达可忽略不计。
2.4 SR-B1介导的疏水性外源物跨胎盘转运的体外验证
进行了体外实验以研究SR-B1在介导疏水性MCCPs跨胎盘转移中的作用。本研究通过高内涵成像评估了SR-B1在JEG-3细胞（一种人胎盘绒毛膜癌细胞系）和巨噬细胞（通常表现出SR-B1表达）中的表达。在阴性对照中未观察到显著的SR-B1信号。MCCPs的暴露使SR-B1在JEG-3和巨噬细胞中的表达分别上调至对照水平的1.20倍或1.90倍。罗格列酮（rosiglitazone， Rosi）是一种已知的PPARγ激动剂，其激活会上调SR-B1表达。与Rosi共同暴露增强了SR-B1的表达，超过了单独MCCPs暴露。相反，MCCPs与阻断脂质转运-1（block lipid transport-1, BLT-1）（SR-B1转运抑制剂）的共同暴露导致SR-B1表达水平与单独MCCPs暴露相当，这与BLT-1已知的与SR-B1结合阻断其转运功能而不影响表达的机制一致。结果通过蛋白质印迹实验进一步验证。
接下来，本研究评估了SR-B1在介导JEG-3细胞和巨噬细胞中MCCPs转运的作用。10分钟的MCCPs暴露对照证实，检测到的MCCPs水平代表真实的细胞摄取，而非表面吸附。与MCCPs暴露组相比，在JEG-3和巨噬细胞中，与Rosi共同暴露的细胞内MCCPs浓度显著更高。相反，与MCCPs和BLT-1共同处理导致与MCCPs暴露组相比，JEG-3和巨噬细胞中细胞内MCCPs浓度显著降低。值得注意的是，处理组之间MCCPs浓度变化的幅度在巨噬细胞中比JEG-3更大，这与SR-B1（CD36超家族的清道夫受体成员）在巨噬细胞中较高的基础表达一致。这些结果确立了SR-B1是促进细胞MCCPs摄取的关键转运蛋白。
进行了分子对接模拟以阐明SR-B1与疏水性外源物（MCCPs和HBCD）的结合机制。尽管有报道称BLT-1直接与SR-B1的Cys384结合，但本研究发现MCCPs和HBCD具有不同的相互作用位点。结果暗示MCCPs和HBCD不直接与SR-B1结合。鉴于SR-B1在HDL-胆固醇转运中的公认作用，以及MCCPs， HBCD和胆固醇在胎盘中共有的相似时空分布模式，这些疏水性外源物可能通过SR-B1-HDL介导的通路转运。本研究进一步进行了快速平衡透析（rapid equilibrium dialysis， RED）以评估HDL与具有不同亲脂性的化学物质之间的结合亲和力。选择了包括吡哌酸、阿莫西林、氨苄西林、磺胺、罗红霉素、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯、狄氏剂、灭蚁灵、syn-得克隆、MCCPs和HBCD在内的11种化学物质。MCCPs和HBCD的HDL结合化学物分数分别为94%和100%。类似地，罗红霉素、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯、狄氏剂、灭蚁灵和syn-得克隆的HDL结合分数高达90%-100%，证实这些疏水性化合物可以与HDL高亲和力结合。相比之下，吡哌酸、阿莫西林、氨苄西林和磺胺的HDL结合分数相对较低（5%-40%），并且观察到结合分数与化学亲脂性之间存在显著的正相关。
2.5 SR-B1介导的疏水性外源物和脂质跨胎盘转运的体内验证
为了验证SR-B1在早期阶段介导MCCPs母体转移中的作用，进行了体内实验，给孕鼠灌胃MCCPs，同时给予Rosi或BLT-1。在E11.5，比较了各组MCCPs在DZ， JZ, LZ和FL中的分布模式。计算了胎盘中MCCPs的LZ/DZ强度比，以校正母体MCCP浓度的潜在变化。与MCCPs暴露组相比，MCCPs与Rosi的共同暴露增加了该比值，而与MCCPs和BLT-1的共同暴露降低了该比值。一致地，MCCPs的FL相对于DZ（FL/DZ）的强度比显示出类似的变化。与MCCPs组相比，MCCPs与Rosi的共同处理显著增加了MCCPs的强度比，而与MCCPs和BLT-1的共同处理降低了强度比。
鉴于SR-B1在屏障形成期脂质转运中的作用，在SR-B1激活/抑制的同时，对胎盘和胎儿进行了空间脂质组学分析。与MCCPs暴露组相比，MCCPs与Rosi的共同处理显著增加了胎盘脂质的LZ/DZ强度比，例如Cer (d42:1)、DG (34:2)、MG (16:0)和PE (40:6)。相反，与MCCPs和BLT-1的共同处理显著降低了这些脂质的LZ/DZ强度比。一致地，胎儿中脂质的FL/DZ强度比在SR-B1激活或抑制时表现出类似的变化。MCCPs与Rosi的共同处理显著增加了多种脂质的强度比，而与MCCPs和BLT-1的共同处理降低了它们。脂质和MCCPs这些协调的体内变化证实，SR-B1激活/抑制调控了屏障形成期疏水性外源物和脂质从胎盘到胎儿的转运。
2.6 疏水性毒物早期暴露与胎儿神经脂质稳态的持续性破坏相关
接下来，本研究对MCCPs暴露的胎儿进行了空间代谢组学分析，以评估早期暴露后的代谢破坏效应。火山图分析表明，与对照组相比，在E11.5时，多种磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol, PG）、磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol， PI）、Cer和DG物种在低剂量和高剂量MCCPs暴露组的CNS（包括大脑和脊髓）中表现出显著升高的浓度。成像分析显示这些脂质在CNS中发生了明显变化。在低剂量和高剂量组中，这些脂质在CNS中的强度相对于对照组分别显著增加至1.46–7.05倍和1.29–5.82倍。CNS中这些所谓毒性脂质（鞘脂、甘油酯和甘油磷脂）在E11.5的增加在E17.5更为明显。低剂量MCCPs暴露导致PG、PI和DG的丰度增加1.38–3.39倍，高剂量暴露显著增加了PG、PI、Cer和DG的强度（2.67–7.66倍）。E11.5发生的快速大脑扩张和不同脑区的形成表明，此阶段是一个关键的神经发育窗口。本研究进一步在细胞模型中验证了MCCPs对CNS的脂毒性作用。MCCPs的暴露在不引起显著细胞毒性的情况下，诱导了BV2细胞中脂质丰度的显著增加。因此，母体在早期（E11.5）暴露于MCCPs与CNS的脂毒性效应相关，胎儿神经脂质稳态的破坏持续到E17.5。
本研究还评估了HBCD在胎鼠中诱导的空间代谢改变。空间分辨代谢组学揭示，暴露于低剂量和高剂量的HBCD均导致胎鼠肝脏中尿苷二磷酸葡萄糖、甲酰嘧啶核苷三磷酸和D-苏糖醇的强度显著下降，且这些效应从E11.5持续到E17.5。这表明胎儿肝脏葡萄糖相关代谢的失调与母体HBCD暴露有关。总之，这些结果表明，疏水性外源物的早期暴露与胎鼠发育代谢紊乱相关，尽管不同毒物的效应各异。
讨论
本研究首次实现了妊娠期毒物的可视化，并揭示了它们与内源性代谢物在发育中胎盘中的时空异质性。此外，本研究成功地将SR-B1识别为在跨胎盘屏障形成之前将疏水性毒物和脂质从胎盘转运到胎儿的转运蛋白。最后，本研究发现关键窗口期（E10-E12：向血液营养过渡的阶段）的暴露负担显著高于先前的估计，并且与持续的发育代谢紊乱相关。
生物监测研究评估产前毒物暴露通常分析母体生物样本（例如血液、尿液、头发）和胎儿样本（例如脐带血、羊水、胎粪），比较它们的浓度以评估跨胎盘转移和母体暴露。这些研究仅捕获分娩时或接近分娩时的胎盘转移，缺乏关于环境毒物在妊娠期间跨胎盘转运的动态变化数据。在本研究中，原位成像方法成功地描绘了MCCPs在整个妊娠期间胎盘和胎儿组织中的时空动态。结果表明，MCCPs在E11.5的胎儿-母体分布比（1.29–20.5）大约是在E18.5（0.07–1.28）时的8.4–38.2倍。这种显著升高的跨胎盘转运效率可归因于这些化合物（包括CPs和HBCD）积累到HDL相关的脂质核心，随后在跨胎盘屏障形成期间通过SR-B1转运到胎儿。值得注意的是，持久性有机污染物是一组疏水性毒物，已引起全球关注。尽管大多数持久性有机污染物报告的胎儿-母体比率范围在0.3到6.3之间，但仅依赖妊娠后研究的研究很可能大大低估了这些化学物质的胎儿暴露负担和潜在毒理学后果。
胎盘是维持胎儿发育的关键保护器官，通过调节母体和胎儿循环之间的营养和代谢物交换，同时作为抵御外源物暴露的选择性屏障。最近，一些研究关注胎盘形成过程中沿母胎轴的细胞异质性、基因表达模式和形态变化。为了检查胎盘组织微环境中代谢物的变化，通常将整个胎盘组织匀浆进行测量，从而掩盖了关于空间定位的关键信息。本研究开发的Ph4PCl增强的AFAI-MSI对可视化小分子具有高灵敏度，能够在发育的胎盘中同时定位内源性代谢物和疏水性毒物。引人注目的是，这些分子在胎盘发育过程中表现出明显的时空异质性，特别是脂质在E11.5与E17.5时在JZ、DZ和LZ之间表现出不同的分布模式。这些发现与早孕期间从组织营养向血液营养过渡的既定过程一致。具体来说，E10到E12之间的时期代表了血液营养的开始——这是一种依赖迷路、血管介导的过程，其中营养物（包括脂质）通过逆流交换从母体血窦转移到胎儿毛细血管。本研究发现，这种血液营养阶段不仅促进了有效的母胎营养转移，而且在胎盘屏障完全成熟之前，也实现了与内源性脂质一起的毒物意外高效率转运。这通过观察到胎儿的最大暴露发生在胎盘屏障完全形成之前得到验证。因此，向血液营养过渡的阶段（E10–E12）被证明是胎儿暴露于毒物的关键发育窗口。
作为一个动态重塑的器官，胎盘在发育过程中经历结构成熟和不断变化的膜，这可能在被动渗透性上产生时间和区域依赖性差异。内源性脂质的空间分布模式揭示了微环境变化，这些变化会调节分配和随后的扩散动力学。事实上，被动扩散一直被认为是疏水性化合物跨胎盘转移的主要机制。但仅凭这一机制并不能完全解释本研究中观察到的疏水性外源物和脂质在胎盘中的时空异质性。本研究系统地筛选了在向血液营养过渡阶段（E10–E12）涉及脂质和疏水性外源物转运的所有蛋白质，并将SR-B1识别为介导疏水性化合物跨胎盘转移的关键介质。SR-B1以高亲和力与HDL结合，促进脂溶性分子的转运，最显著的是从富含胆固醇的HDL颗粒中摄取胆固醇酯进入细胞。MCCPs和HBCD观察到的相似转运行为，加上它们在胎盘中与胆固醇相似的分布模式，强烈表明这些环境污染物积累在HDL颗粒的脂质核心内。随后通过SR-B1介导的通路被共同转运到滋养层细胞中。化学亲脂性与HDL结合亲和力之间的显著正相关表明，多种疏水性化学物质可以与HDL高亲和力结合，并经历SR-B1介导的跨胎盘转运。因此，化学物质特定的HDL亲和力将决定其在早孕期的胎儿暴露负担。SR-B1在肝脏和类固醇生成组织中高表达，它也是胎盘中的HDL受体。它在胎盘内的母胎胆固醇交换中起着关键作用。SR-B1缺陷的小鼠胚胎表现出高发生率的露脑畸形和宫内生长受限。本研究发现，SR-B1介导的向血液营养过渡阶段的脂质供应可能无意中促进了疏水性毒物向胎儿的转移。虽然空间异质性不排除被动扩散的重大贡献，但SR-B1介导的转运机制在早期妊娠中起着关键、阶段特异性的作用，并占主导地位，从而导致疏水性毒物的跨胎盘转运效率显著增加。在后期发育阶段，胎儿获得了自主的脂质合成能力，因此，随着SR-B1在DZ和JZ中表达减少，胎盘屏障形成，阻碍了疏水性毒物和脂质的转移。胎盘SR-B1的这种下调代表了胎盘屏障建立的关键事件。
在向血液营养过渡阶段（E10-E12）高暴露于毒物（例如MCCPs）可能诱发显著的发育代谢紊乱。利用MSI技术，本研究发现，在胎盘屏障形成之前的MCCPs暴露导致毒性脂质（例如神经酰胺、二酰基甘油）在胎儿CNS中过度沉积，其效应在整个妊娠期持续存在。这些脂质的过度积累会引发细胞应激和功能障碍；因此它们被称为“毒性脂质”。例如，观察到的升高的神经酰胺可能潜在地诱导发育中的胎儿大脑的内质网应激和脂毒性。这种脂毒性在BV2小胶质细胞中得到进一步验证，与之前关于短链氯化石蜡（short-chain chlorinated paraffin， SCCP）在同一细胞系中诱导脂质上调的报道一致。这种过度的细胞内脂质积累可能直接诱导线粒体功能障碍和氧化应激。支持这些发现的是，现有的关于CPs的神经毒性研究表明，斑马鱼胚胎中的化学暴露损害了幼体的运动能力。本研究首次提供了直接证据，表明疏水性毒物的早孕期暴露与胎儿神经脂质稳态的持续性破坏有关，突出了在妊娠期减轻毒物暴露对于预防后代代谢失调和疾病易感性的至关重要性。
本研究受几个限制。首先，将半定量MSI数据与公共snRNA-seq数据集整合应被视为生成假设，因为胎盘中滋养层转录状态可能受品系、饮食和饲养条件的潜在差异影响。其次，“脂质相关”候选物筛选可能忽略了其他胎盘转运蛋白（例如ABC/SLC家族）的潜在作用。第三，由于本研究主要依赖小鼠模型，将研究结果外推至人类时应谨慎。第四，本研究缺乏明确的下游功能或结构终点，未来需要功能研究来确立神经发育毒性。
结论
总而言之，本研究首次呈现了跟踪疏水性毒物和内源性代谢物在妊娠发育过程中在胎盘和胎儿中的时空图谱。通过将空间共定位分析与胎盘组织的snRNA-seq整合，本研究将SR-B1识别为在胎盘屏障形成之前介导疏水性毒物和脂质向胎儿转移的关键转运蛋白。研究发现表明，向血液营养过渡的阶段构成了脂质摄取和无意中暴露于疏水性毒物的关键发育窗口，并且与持续的发育代谢紊乱相关。
