《MEDIATORS OF INFLAMMATION》：SNHG5 Exacerbates Sepsis-Induced Inflammatory Injury in Coronary Artery Endothelial Cells by Regulating METAP2-Mediated IL-8 Secretion
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本文聚焦脓毒症（Sepsis）心血管损伤，揭示长链非编码RNA（lncRNA）SNHG5通过海绵吸附miR-377-3p上调蛋氨酸氨肽酶2（METAP2）表达，进而促进白介素-8（IL-8）分泌及内皮细胞凋亡的新调控轴。该研究为深入理解脓毒症内皮功能障碍的分子机制提供了新视角。
引言
脓毒症是一种由感染引发的危及生命的全身性反应，其中心血管系统是易损靶点，内皮功能障碍在其中扮演核心驱动角色。长链非编码RNA（lncRNA）作为基因表达的重要调控因子，在脓毒症发病机制中的作用日益受到关注。本研究旨在探究lncRNA SNHG5在脓毒症诱导的冠状动脉损伤中的潜在作用，并解析其调控机制。
材料与方法
本研究采用盲肠结扎穿刺术（CLP）构建小鼠脓毒症模型。收集血清和冠状动脉组织，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和实时定量聚合酶链反应（qPCR）评估炎症标志物及lncRNA表达。在体外实验中，使用脓毒症小鼠血清刺激小鼠主动脉内皮细胞（mAECs）。通过双荧光素酶报告基因实验探究SNHG5/微小RNA（miRNA）-377-3p/蛋氨酸氨肽酶2（METAP2）轴的相互作用。采用功能缺失、功能获得及挽救实验阐明这些基因在脓毒症中的功能。实验还涉及蛋白质印迹（Western blotting）、流式细胞术检测细胞凋亡、细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力以及免疫共沉淀（Co-IP）等技术。
结果
- 1.
脓毒症小鼠冠状动脉中SNHG5异常高表达：与假手术组相比，脓毒症小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平显著升高。冠状动脉组织中，内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达下调，内皮素-1（ET-1）蛋白表达上调，表明内皮功能紊乱。在检测的多个炎症相关lncRNA中，SNHG5在脓毒症小鼠冠状动脉组织和血清中上调最为显著。
- 2.
SNHG5作为miR-377-3p的竞争性内源RNA调控METAP2表达：生物信息学分析与实验验证表明，SNHG5可作为miR-377-3p的分子海绵（ceRNA），从而上调METAP2的表达。在脓毒症冠状动脉中，miR-377-3p表达下调，METAP2表达上调，且与SNHG5表达呈负/正相关。双荧光素酶报告基因实验证实了miR-377-3p与SNHG5及METAP2 3′-非翻译区（UTR）的特异性结合。
- 3.
SNHG5在mAECs中促进METAP2表达：脓毒症血清刺激可显著上调mAECs中SNHG5和METAP2的表达，下调miR-377-3p表达。敲低SNHG5能上调miR-377-3p并抑制METAP2的表达，而使用miR-377-3p抑制剂可逆转此效应，蛋白水平变化与RNA一致。
- 4.
敲低SNHG5改善脓毒症诱导的内皮细胞凋亡：脓毒症血清处理降低了mAECs的细胞活力并诱导其凋亡，而敲低SNHG5能提高细胞活力、减少细胞凋亡，并逆转脓毒症血清引起的eNOS下调和ET-1上调。同时，敲低SNHG5降低了促凋亡蛋白半胱天冬酶-3（caspase-3）和Bax的水平，提高了抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的水平。此外，SNHG5敲低显著降低了IL-8的分泌，该效应可被miR-377-3p抑制剂逆转。
- 5.
miR-377-3p抑制METAP2促进的脓毒症内皮细胞凋亡：敲低METAP2或过表达miR-377-3p均可抑制脓毒症血清诱导的内皮细胞凋亡，降低caspase-3和Bax蛋白水平，上调eNOS和Bcl-2蛋白水平。值得注意的是，虽然IL-8 mRNA水平未变，但METAP2敲低减少了IL-8的分泌，并增加了细胞内IL-8水平，Co-IP实验证实了METAP2与IL-8在脓毒症条件下的直接相互作用。相反，过表达METAP2会增加IL-8分泌和内皮细胞凋亡，而这些效应可被miR-377-3p模拟物所减弱。
讨论
内皮功能障碍是脓毒症心血管损伤的标志。本研究发现SNHG5在脓毒症冠状动脉中显著上调，并首次证实其通过ceRNA机制吸附miR-377-3p，在脓毒症条件下促进冠状动脉内皮细胞凋亡。miR-377-3p在脓毒症中发挥保护性的抗凋亡功能。METAP2作为miR-377-3p的下游靶点，在脓毒症内皮中扮演促凋亡角色，可能通过影响IL-8等蛋白的加工和分泌来发挥作用。IL-8是脓毒症的关键炎症因子，本研究揭示的SNHG5/miR-377-3p/METAP2轴是调控脓毒症中IL-8分泌的新机制。这些发现不仅深化了对脓毒症过度炎症分子基础的理解，也为减轻内皮功能障碍提供了潜在的治疗靶点。
结论
综上所述，在脓毒症小鼠冠状动脉中，SNHG5表达升高。SNHG5可能通过调控miR-377-3p/METAP2/IL-8轴，加剧动脉内皮细胞的炎症损伤。该研究为脓毒症心血管并发症的机制研究和潜在治疗策略开发提供了新的线索。
