用于常规检测玉米种子中Pantoea stewartii subsp. stewartii的双重实时PCR方法

《EPPO Bulletin》：Duplex real-time PCR for routine detection of Pantoea stewartii subsp. stewartii in maize seeds

玉米种子中Pantoea stewartii subsp. stewartii的定量双PCR检测方法研究，提出检测限为1/400份，适用于常规 фитосанитарный 检测。

　　

摘要

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Pantoea stewartii subsp. stewartii 是一种植物病原菌，会感染玉米，导致“Stewart’s wilt”（斯图尔特萎蔫病）和叶片沿叶脉出现灼烧症状。该菌原产于北美洲，通过种子传播，被列为检疫性有害生物，在欧盟范围内受到重点监控。尽管已采取了一系列植物检疫措施，但目前仍缺乏可靠的检测方法。现有的检测方法（基于抗原识别技术ELISA或DNA检测技术PCR）往往无法将该病原菌与其近缘亚种区分开来，从而导致假阳性结果。最近的研究发现了能够提高 P. stewartii subsp. stewartii 检测特异性的PCR引物组合。基于这些研究结果，我们提出了一种适用于玉米种子检测的诊断方案，采用定量双链实时PCR技术进行常规实验室检测。其中，引物对cpsAB2313F/cpsR用于特异性检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii，而引物对Wu-F/Wu-R则用作内部扩增对照。该检测方法能够在2000粒健康种子中检测出1粒受污染的种子；但在1000粒种子中仅能检测出1粒受污染种子时，重复性仅为83.3%。因此，将400粒种子中的1粒受污染种子作为检测限。这种样本量适用于常规种子检测程序。

利用双链实时PCR技术对玉米种子中的 Pantoea stewartii subsp. stewartii 进行常规检测

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Pantoea stewartii subsp. stewartii 是一种危害玉米的植物病原菌，会引起“Stewart’s wilt”（斯图尔特萎蔫病）和叶片沿叶脉的灼烧现象。这种细菌原产于北美洲，可通过种子传播，被归类为检疫性有害生物，在欧盟受到严格监控。尽管实施了植物检疫措施，但目前仍缺乏可靠的检测方法。现有的检测技术（如基于抗原识别的ELISA或DNA检测的PCR）往往无法区分该病原菌与其近缘亚种，从而导致误判。最新研究开发出了特异性更高的PCR引物组合，提高了 P. stewartii subsp. stewartii 的检测准确性。基于这些成果，我们提出了一种基于定量双链实时PCR技术的玉米种子检测方案，适用于实验室常规检测。其中，引物对cpsAB2313F/cpsR用于特异性检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii，而引物对Wu-F/Wu-R作为内部扩增对照。该检测方法在2000粒健康种子样本中可检测出1粒受污染种子；但在1000粒种子样本中仅能检测出1粒受污染种子时，重复性为83.3%。因此，将400粒种子中的1粒受污染种子作为检测限。这种样本量适用于常规种子检测流程。

利用双链实时PCR技术对玉米种子中的 Pantoea stewartii subsp. stewartii> 进行常规检测

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Pantoea stewartii subsp. stewartii 是一种影响玉米的植物病原菌，会导致“Stewart’s wilt”（斯图尔特萎蔫病）和叶片叶脉处的灼伤症状。这种细菌源自北美洲，通过种子传播，属于检疫性有害生物，在欧盟受到严密监控。尽管实施了植物检疫措施，但目前尚无可靠的检测方法。现有的检测技术（基于抗原识别（ELISA）或DNA检测（PCR）难以区分该病原菌与其近缘亚种，可能导致假阳性结果。最新研究开发出了特异性更高的PCR引物组合，提高了 P. stewartii subsp. stewartii 的检测准确性。基于这些研究结果，我们开发了一种适用于玉米种子检测的诊断方案，采用定量双链实时PCR技术。引物对cpsAB2313F/cpsR用于特异性检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii，引物对Wu-F/Wu-R作为内部扩增对照。在2000粒健康种子样本中，该方法可检测出1粒受污染种子；而在1000粒种子样本中，仅能检测出1粒受污染种子时的重复性为83.3%。因此，将400粒种子中的1粒受污染种子作为检测限。这种样本量适用于常规种子检测程序。

利用双链实时PCR技术在玉米种子中常规检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii

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Pantoea stewartii subsp. stewartii 是一种危害玉米的病原菌，会导致“Stewart’s wilt”（斯图尔特萎蔫病）和叶片叶脉处的灼伤症状。这种细菌原产于北美洲，通过种子传播，属于检疫性有害生物，在欧盟受到严格监控。尽管实施了植物检疫措施，但目前仍缺乏可靠的检测方法。现有的检测技术（如基于抗原识别的ELISA或DNA检测的PCR）往往无法区分该病原菌与其近缘亚种，可能导致误判。最新研究开发出了特异性更高的PCR引物组合，提高了 P. stewartii subsp. stewartii 的检测准确性。基于这些研究结果，我们开发了一种适用于玉米种子检测的诊断方案，采用定量双链实时PCR技术。引物对cpsAB2313F/cpsR用于特异性检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii，引物对Wu-F/Wu-R作为内部扩增对照。在2000粒健康种子样本中，该方法可检测出1粒受污染种子；而在1000粒种子样本中，仅能检测出1粒受污染种子时的重复性为83.3%。因此，将400粒种子中的1粒受污染种子作为检测限。这种样本量适用于常规种子检测程序。

使用双链实时PCR技术对玉米种子中的 Pantoea stewartii subsp. stewartii> 进行常规检测

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Pantoea stewartii subsp. stewartii 是一种影响玉米的植物病原菌，会导致“Stewart’s wilt”（斯图尔特萎蔫病）和叶片叶脉处的灼伤症状。这种细菌原产于北美洲，通过种子传播，属于检疫性有害生物，在欧盟受到严格监控。尽管采取了植物检疫措施，但目前仍缺乏可靠的检测方法。现有的检测技术（如基于抗原识别的ELISA或DNA检测的PCR）往往无法区分该病原菌与其近缘亚种，从而导致误判。最新研究开发出了特异性更高的PCR引物组合，提高了 P. stewartii subsp. stewartii 的检测准确性。基于这些研究结果，我们开发了一种适用于玉米种子检测的诊断方案，采用定量双链实时PCR技术。引物对cpsAB2313F/cpsR用于特异性检测 Pantoea stewartii subsp. stewartii，引物对Wu-F/Wu-R作为内部扩增对照。在2000粒健康种子样本中，该方法可检测出1粒受污染种子；而在1000粒种子样本中，仅能检测出1粒受污染种子时的重复性为83.3%。因此，将400粒种子中的1粒受污染种子作为检测限。这种样本量适用于常规种子检测程序。