《Scientific Reports》：Characterization of sooty blotch and flyspeck fungi on mango (Mangifera indica L.) in Peninsular Malaysia
编辑推荐：
本研究针对芒果果实表面常见的煤污病和蝇粪病（SBFS）病原复合体，综合运用形态学、分子系统学（ITS、LSU区域序列分析）及科赫氏法则（原位与离体接种）等方法，首次对马来西亚半岛多个果园的SBFS病原真菌进行了系统鉴定与致病性验证。研究揭示了Zasmidium、Peltaster、Exophiala、Scolecobasidium四个属的多样性，并发现了一个新的Peltaster-like物种，明确了其与侵染水平（菌落数/果CPM、果面覆盖率）的交互关系，为理解该病害的生态学及未来制定防控策略奠定了基础。
香甜的芒果是许多人喜爱的热带水果，但在果园里，它们的“皮肤”常常会被一些不请自来的“客人”弄脏。这些“客人”在果实表面留下黑色的烟污状斑块或成簇的小黑点，让果实卖相大跌，严重影响其商品价值。这种现象在植物病理学上被称为煤污病和蝇粪病，通常被合称为SBFS病害复合体。对于种植者来说，这无疑是一个令人头疼的问题。然而，在马来西亚这样的芒果主产区，究竟是哪些微生物导致了这些难看的斑点？它们之间有何不同？又该如何科学地确认它们的“犯罪事实”？在此之前，人们对马来西亚芒果上SBFS真菌的具体“身份”和“作案能力”缺乏系统的了解。为了解决这些问题，一组研究人员在2019年的10月至11月间，深入马来西亚半岛的霹雳州、彭亨州和玻璃市三个州的八个果园，展开了一场针对芒果SBFS病原真菌的“身份调查”。
为了回答上述问题，研究人员在《Scientific Reports》上发表的研究中，采用了多管齐下的策略。他们首先从出现症状的果实上采集样本，记录下每个果实的染病严重程度（包括每果菌落数CPM和果面被覆盖的百分比）。接着，他们运用经典的微生物学方法，通过形态特征对分离纯化出的真菌进行初步“画像”。但仅靠“长相”容易认错“人”，于是他们动用了更精准的“基因身份证”技术——对真菌核糖体DNA的内部转录间隔区（ITS）和大亚基（LSU）区域进行测序，并构建系统发育树来进行分子鉴定，这相当于为每种真菌建立了独一无二的基因家谱。最后，为了坐实这些真菌的“罪名”，研究人员没有轻信关联性，而是严格按照科学法则，在健康的芒果果实上进行了“犯罪现场重现”。他们改进了经典的科赫氏法则，通过两种方式（在果园原位接种和在实验室对离体果实接种）来验证分离出的真菌是否能引起典型的SBFS症状，从而确认其病原性。
研究结果
SBFS的发生与真菌分离
研究人员从三个州八个果园共采集了87个具有典型SBFS症状的芒果果实。统计分析显示，不同州之间，果实的感染水平（无论是CPM还是果面覆盖率）存在显著差异，这表明环境或果园管理因素可能影响了病害的发生程度。
基于形态学的真菌鉴定
从这些病果上，研究人员最终获得了31株纯化真菌培养物。通过显微镜下仔细观察菌落和孢子的形态特征，他们将这些真菌初步归类到四个属：Zasmidium、Peltaster、Exophiala和Scolecobasidium。这初步描绘了马来西亚芒果SBFS真菌群体的多样性轮廓。
基于分子系统学的鉴定
形态鉴定有时会“撞脸”，因此研究者求之于基因。他们对这些菌株的ITS和LSU基因区域进行了测序和系统发育分析。结果表明：
- •
分子数据支持了其中三个属（Zasmidium、Exophiala和Scolecobasidium）的鉴定结果。
- •
然而，那些最初被形态学归为Peltaster属的菌株，在系统发育树上形成了一个独立且独特的分支，与已知的Peltaster物种明显分开。这意味着它们很可能代表了一个尚未被描述的新物种，研究中将其暂定为“Peltaster-like species”（类盾壳菌物种）。这是本研究的一个重要发现。
- •
分析还发现，不同州采集的真菌，其属的组成也存在显著差异，暗示了地理因素对病原菌群体结构的影响。
致病性验证
怀疑一个微生物是病原，就需要确凿的证据。研究人员挑选了12个分离菌株，在健康的芒果果实上进行了接种实验。
- 1.
原位接种：直接在果园中将真菌孢子悬浮液接种到仍挂在树上的健康果实表面。
- 2.
离体接种：将健康的果实采摘后，在实验室条件下进行接种。
无论哪种方法，接种了这些真菌的果实，在经过一段时间的培养后，都重新出现了典型的煤污状或蝇粪状病斑。而从这些新病斑上再次分离出的真菌，经鉴定与最初接种的真菌相同。这一完整的“分离—接种—再分离”过程，符合科赫氏法则的要求，确凿地证明了这12个菌株（涵盖了上述几个属）就是导致芒果SBFS的病原真菌。
研究结论与讨论
本研究首次对马来西亚半岛芒果上的煤污病与蝇粪病（SBFS）病原真菌复合体进行了全面、系统的表征。研究不仅通过实地调查揭示了该病害在霹雳、彭亨和玻璃市三州的普遍发生，更重要的是，综合运用形态、分子和病理学方法，明确了该病害病原菌的多样性主要包括Zasmidium、Exophiala、Scolecobasidium以及一个新颖的Peltaster-like物种。尤为关键的是，研究通过改良的科赫氏法则（结合原位与离体接种）证实了这些真菌的致病性，为它们作为SBFS病原体的身份提供了坚实证据。
研究的统计分析进一步指出，SBFS的感染水平（如果实表面的菌落数量和覆盖面积）以及病原真菌的属级构成，在不同地区之间存在显著差异。这一发现暗示，环境条件、果园微气候或农业管理措施可能在塑造当地SBFS病原菌群体结构和病害严重度方面扮演着重要角色。
这项工作的意义在于填补了知识空白。它首次为马来西亚芒果SBFS病害建立了病原学基础，鉴定出的物种多样性，特别是那个潜在的新的Peltaster-like物种，为真菌分类学增添了新的信息。所采用的综合鉴定与致病性验证方法，为未来在马来西亚乃至其他热带地区开展类似的植物表面真菌病害研究提供了可参考的范本。最终，对这些病原“元凶”的精准识别和了解，是发展针对性防治策略、帮助果农有效管理SBFS病害、减少经济损失至关重要的第一步。
