实验与计算研究揭示了Apc2独立下的Apc10-Apc11a相互作用，以及这种相互作用如何在溶组织内阿米巴（Entamoeba histolytica）的后期促进复合体（anaphase promoting complex）中调控氧化应激反应

《Acta Parasitologica》：Experimental and Computational Insights into Apc2 Independent Apc10-Apc11a Interaction and Oxidative Stress Response in the Anaphase Promoting Complex of Entamoeba histolytica

裂解酵母 APC 复合体在缺乏 Apc2 的情况下，通过酵母双杂交、体外结合实验及分子模拟证实 Apc10 和 Apc11a 能独立相互作用。氧化应激（H2O2）导致两者基因表达下调，恢复后表达上调，表明 APC 可能通过独特结构实现细胞周期调控，并在应激下优先激活修复机制。

　　

摘要

目的

在真核生物中，后期促进复合物（APC）作为一种多蛋白泛素连接酶，负责调控染色体的分离。其亚基之间的动态相互作用对APC的功能至关重要，因为这些相互作用通常是短暂的，并且会随着细胞周期不同阶段的进展而发生变化。溶组织内阿米巴（E. histolytica）拥有六个不同APC亚基的七个同源物；然而，Apc2明显缺失。这引发了关于溶组织内阿米巴 APC的结构组织和功能机制的有趣问题。鉴于Apc2-Apc10-Apc11相互作用在真核生物APC功能中的关键作用，我们试图研究在溶组织内阿米巴中Apc10和Apc11a是否能够独立于Apc2进行相互作用。

方法

我们采用了酵母双杂交（Y2H）实验、体外结合实验、分子对接、模拟和突变分析等方法来研究EhApc10与EhApc11a之间的相互作用。由于Apc11的RING结构域具有氧化还原敏感性，我们还通过qRT-PCR技术研究了氧化应激对EhApc11a和EhApc10基因表达的影响。

结果

研究表明，在Y2H实验、体外结合实验和计算分析中，EhApc10和EhApc11a能够独立于Apc2进行相互作用。在氧化应激（H?O?）条件下，EhApc11a和EhApc10的表达均下降，表明在应激状态下这两种基因的表达受到抑制。去除氧化应激后，这两种基因的表达均上调，表明细胞功能得以恢复。

结论

溶组织内阿米巴的APC可能采用了一种独特的结构组织方式，即EhApc10和EhApc11a可以在没有Apc2的情况下相互作用。在H?O?条件下这两种基因表达下降的现象表明，细胞在应激状态下会优先考虑修复和生存，而非继续进行后期分裂。它们在应激后的表达上调则说明存在一种补偿机制，有助于恢复正常的细胞周期动态。