EB病毒载量与miR-BART10-3p表达在多发性硬化症中的关联：一项病例对照研究

《Multiple Sclerosis and Related Disorders》：EBV Viral Load and miR-BART10-3p Expression in Multiple Sclerosis: A Case-Control Study

EBV病毒载量及miR-BART10-3p表达水平与伊朗南部多发性硬化症患者病情及治疗反应相关。病例对照研究显示未治疗及干扰素β组EBV病毒载量分别升高2.1倍和1.7倍，miR-BART10-3p表达升高2.74倍和1.97倍，而利妥昔单抗组显著降低。EBV活性指标与年龄性别无关，但B细胞靶向治疗有效抑制病毒相关分子表达。

　　

作者名单：Sanaz Baghban Rahimi、Seyed Mohammad Ali Hashemi、Maryam Poursadeghfard、Gholamhossein Tamaddon、Marzieh Jamalidoust、Gholamreza Daryabor、Jamal Sarvari

伊朗设拉子医科大学医学院细菌学与病毒学系

摘要

背景

：Epstein-Barr病毒（EBV）与多发性硬化症（MS）有关，但其潜在的分子机制尚未完全阐明。这项来自伊朗南部的病例对照研究调查了EBV病毒载量及EBV编码的miR-BART10-3p表达与MS之间的关联。

方法

研究共纳入110名参与者：40名新诊断的MS患者（ND-MS）、20名接受干扰素-β治疗的患者（MS-IFN）、20名接受B细胞耗竭单克隆抗体治疗的患者（MS-mAb），以及30名年龄和性别匹配的健康对照组（HC）。收集了外周血样本，分离出血细胞层并储存于-70°C待后续分析。使用Trizol试剂从血细胞层中提取总DNA和RNA。通过q-PCR和q-RT-PCR分别检测EBV基因组载量和EBV编码的microRNA BART10-3p表达水平。通过ELISA检测EBV病毒衣壳抗原（VCA）IgG的血清阳性状态。

结果

参与者的平均年龄为37.7 ± 8.5岁（范围：22–61岁）。患者组中有26名男性（占32.5%，n=80），健康对照组中有10名男性（占33.3%，n=30）。ND-MS组（2.1倍增加；p < 0.001）和MS-IFN组（1.7倍增加；p = 0.03）的EBV病毒载量显著高于健康对照组。相比之下，MS-mAb组的病毒载量较低，无统计学差异（0.2倍；p = 0.17）。同样，miR-BART10-3p在ND-MS组（平均值=4.06；增加2.74倍；p < 0.001）和MS-IFN组（平均值=2.91；增加1.97倍；p < 0.001）的表达水平显著升高，而在MS-mAb组则显著降低（平均值=0.43；增加0.29倍；p < 0.001）。各组之间EBV-VCA IgG血清阳性率无显著差异（p=0.55）。此外，EBV病毒载量、miR-BART10-3p表达水平及EBV-VCA IgG血清阳性率与参与者的年龄或性别均无显著关联（p > 0.05）。

结论

这些发现表明EBV病毒载量和miR-BART10-3p表达可能在MS的发病机制中起作用。这些分子标志物可作为监测EBV活性和疾病进展的补充指标。需要进一步研究来验证这些结果并探索其临床应用价值。

引言

多发性硬化症（MS）是一种慢性、免疫介导的中枢神经系统（CNS）疾病，其特征是髓鞘脱失、轴突退化及进行性神经功能障碍。尽管其确切病因尚不清楚，但MS被认为是一种复杂的多因素疾病（Filippi等人，2018年）。流行病学和分子证据表明，MS的发生与遗传易感性、环境因素、感染因子及表观遗传机制相互作用有关（Zheleznyakova等人，2017年）。多种病毒已被认为与MS有关，包括人类疱疹病毒6型（HHV-6）、水痘-带状疱疹病毒（HHV-3）、巨细胞病毒（HHV-5）、John Cunningham病毒（JCV）以及人类内源性逆转录病毒（HERVs）（James和Georgopoulos，2023年；Morris等人，2019年）。特别是Epstein-Barr病毒（EBV）受到了广泛关注，大量证据表明其在MS发病机制中起关键作用（Hoover和Higginbotham，2020年）。 EBV（人类疱疹病毒4型，HHV-4）是一种γ-疱疹病毒，感染了全球超过90%的人口（Hoover和Higginbotham，2020年）。初次感染后，EBV主要潜伏在B淋巴细胞中。虽然这种潜伏状态在健康个体中通常无症状，但在某些条件下病毒可重新激活并导致多种恶性肿瘤（Soldan和Lieberman，2023年）。除了其致癌潜力外，EBV还被认为可能是自身免疫性疾病（如白癜风（Akolawole等人，2022年）、系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）和原发性干燥综合征（SjS）的诱因或共因子（Houen和Trier，2021年）；这些关联多为相关性（Morawiec等人，2025年）。尽管缺乏确凿的因果关系，但越来越多的流行病学和分子证据支持EBV在自身免疫中的潜在作用，尤其是在MS中（Bjornevik等人，2022年）。 EBV可能通过多种机制促进MS的发展。潜伏状态的EBV通过表达病毒基因和microRNAs（miRNAs）重新编程宿主B细胞，调节B细胞功能并改变关键信号通路（如FAK），从而影响B细胞的增殖和迁移（Delecluse等人，2025年）。动物模型显示，EBV感染的B细胞可侵入大脑，引发慢性CNS炎症（Afrasiabi等人，2023年）。此外，CNS内的感染B淋巴细胞可能分泌自身反应性抗体和促炎细胞因子，导致髓鞘脱失（Jelcic等人，2018年）。其他潜在机制包括分子模拟、旁观者激活以及T细胞免疫监视功能受损（Lanz等人，2022年）。遗传因素，尤其是HLA位点和免疫调节区域，也通过影响EBV病毒载量来调节MS风险，凸显了病毒触发因素与宿主遗传学之间的复杂相互作用（Geginat等人，2017年）。B细胞在CNS和脑脊液（CSF）中的积聚可促进自身反应性T细胞的激活和促炎细胞因子（如TNF-α和IL-6）的释放（Claes等人，2015年）。作为抗原呈递细胞，B细胞可进一步放大针对髓鞘的自身免疫反应（Molnarfi等人，2013年）。在进展性MS患者的脑膜中发现异位淋巴样结构，这有助于维持这种慢性炎症和髓鞘脱失过程（Kolz等人，2025年）。抗CD20单克隆抗体的治疗效果表明B细胞在这些过程中起关键作用，可减轻疾病活动和发展（Soldan和Lieberman，2023年；Gupta和Zamvil，2021年）。 MS患者中EBV病毒载量高于健康对照组，表明病毒复制增加可能促进疾病的发生和发展（Giovannoni等人，2025年；Agostini等人，2018年；Sarkkinen等人，2025年；Domínguez-Mozo等人，2022年）。这种病毒载量还可能影响炎症通路，因为它与免疫激活标志物相关。值得注意的是，像干扰素-β和B细胞靶向药物这样的疾病修饰疗法可以调节EBV载量，表明病毒复制与治疗效果之间存在相互作用（Agostini等人，2018年）。 EBV编码约48种成熟的miRNAs，这些miRNAs调节病毒和宿主基因的表达，并主要在潜伏期表达（Soldan和Lieberman，2023年）。越来越多的证据表明，这些病毒miRNAs可能参与自身免疫性疾病（如MS）的发病机制。例如，EBV-miR-BART4-3p和EBV-miR-BART3-5p的表达与EBV DNA拷贝数及MS相关遗传因素相关（Afrasiabi等人，2023年）。其他miRNAs，如EBV-miR-BHRF1-2-5p和EBV-miR-BHRF1-3，在MS患者的循环系统中也有发现（Wang等人，2017年）。此外，BART衍生的miRNAs（如BART9和BART15）在复发-缓解型MS患者的CSF外泌体中水平升高，提示其在CNS免疫调节中的作用（Mohammadinasr等人，2024年）。鉴于miRNAs是重要的表观遗传调节因子，而表观遗传机制在MS发病机制中的作用日益受到重视（Zheleznyakova等人，2017年），分析EBV编码的miRNAs可能为理解疾病机制提供宝贵见解（Giudice等人，2016年）。 因此，这项病例对照研究旨在量化伊朗南部MS患者和健康对照组中的EBV病毒载量、miR-BART10-3p表达水平及VCA IgG血清阳性状态，以评估它们与疾病发病机制的关联。

样本选择与处理

本研究遵循《赫尔辛基宣言》进行，并获得了设拉子医科大学伦理委员会的批准（IR.SUMS.REC.1402.491）。所有参与者均签署了书面知情同意书。从每位参与者处收集了10 mL外周血（6 mL置于EDTA管中，4 mL置于促凝管中）。样本在室温下以2000 × g离心10分钟，分离出血细胞层、血浆和血清组分。

参与者的人口统计特征

参与者的基本信息见表2。与已知的MS流行病学特征一致，所有患者组中女性占多数。然而，四组之间的性别分布差异无统计学意义（p = 0.112）。不同组之间的年龄分布存在显著差异（p = 0.00021）。新诊断且未接受治疗的MS（ND-MS）组明显年轻于其他组。

讨论

流行病学证据，包括Bjornevik等人的重要纵向研究，证实EBV感染是MS发病的必要步骤，血清转化可使疾病风险增加30倍以上（Bjornevik等人，2022年）。为了探讨其潜在机制，我们分析了80名MS患者和30名健康对照者的EBV感染分子特征，测量了外周血中的EBV病毒载量和miR-BART10-3p表达水平。

结论

我们的研究结果表明，活跃的EBV感染参与了MS的发病机制。我们发现未经治疗的和接受干扰素-β治疗的患者的EBV病毒载量及miR-BART10-3p表达水平显著升高。值得注意的是，miR-BART10-3p是一种高度动态的生物标志物，因为其表达在B细胞耗竭治疗后显著下降。这些结果使EBV病毒载量，尤其是病毒非编码RNA（如miR-BART10-3p），成为有前景的生物标志物。

未来方向

为了将这些发现应用于临床实践，未来的工作应重点关注两个方面：首先，需要进行大规模、多中心的纵向研究，以验证EBV病毒载量和病毒非编码RNA（特别是miR-BART10-3p）作为监测MS疾病活动和治疗反应的可靠生物标志物的有效性；其次，需要开展机制研究，以阐明这些病毒产物的功能作用。

伦理批准与参与同意

本研究遵循《赫尔辛基宣言》进行，并获得了设拉子医科大学伦理委员会的批准（IR.SUMS.REC.1402.491）。所有参与者均签署了书面知情同意书。

数据与材料的获取

本研究生成和/或分析的数据可根据合理请求向相应作者获取。

资助

本研究是Sanaz Baghban Rahimi博士论文的一部分，由设拉子医科大学资助（资助编号：27887和H5-1401-03）。资助方未参与研究设计、数据收集、数据分析或决定提交手稿发表。

作者贡献声明

Sanaz Baghban Rahimi：撰写、审稿与编辑、原始稿撰写、数据可视化、软件使用、研究设计、概念构建。 Seyed Mohammad Ali Hashemi：撰写、审稿与编辑、方法学设计。 Maryam Poursadeghfard：撰写、审稿与编辑、研究设计、概念构建。 Gholamhossein Tamaddon：撰写、审稿与编辑、概念构建。 Marzieh Jamalidoust：撰写、审稿与编辑。 Gholamreza Daryabor：撰写、审稿与编辑。 Jamal Sarvari：撰写：

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

致谢

作者衷心感谢所有参与者的合作，并感谢设拉子医科大学提供的财务和学术支持。