基于抗体的新型多模式高灵敏度免疫测定平台的建立，用于检测农业样品中的苏云金芽孢杆菌Vip3Aa毒素

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Establishment of antibodies-based novel multi-modal highly sensitive immunoassay platforms for detecting Bacillus thuringiensis Vip3Aa toxin in agricultural samples

本研究开发针对Bt来源杀虫蛋白Vip3Aa的单克隆抗体与多克隆抗体，建立双抗体夹心ELISA、荧光微球免疫分析及金纳米颗粒快速检测三种方法，检测限分别为9.68 ng/mL、1.95 ng/mL和31.25 ng/mL，均低于转基因组织报告水平，并在实际农业基质中验证了良好性能和应用性。

　　

摘要

Vip3Aa毒素是一种源自苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）的杀虫蛋白，被广泛用于转基因作物中。为了进行农业监测，需要对Vip3Aa毒素进行灵敏的残留分析。本文制备了一种针对Vip3Aa毒素的单克隆抗体（mAb，H12-mAb）以及多克隆抗体（pAbs，Y26-pAbs），并测定了它们的结合亲和力（分别为1.34 × 10⁷ L/mol和6.35 × 10⁷ L/mol）。利用这一对抗体组合，我们开发了三种互补的检测方法：双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）用于常规定量分析，基于聚集诱导发射荧光微球（AIE）的荧光免疫测定（AIE-FLIA）以提高检测灵敏度，以及基于金纳米颗粒（AuNPs）的侧向流动免疫测定（AuNPs-LFIA）用于快速筛查。这些方法的检测限（LODs）分别为9.68 ng/mL（DAS-ELISA）、1.95 ng/mL（AIE-FLIA）和31.25 ng/mL（AuNPs-LFIA），远低于转基因组织中报道的Vip3Aa表达水平（> μg/g）。在代表性农业样本中验证了这些方法的性能，结果显示：单次检测的回收率为90.3–99.1%，变异系数（CV）为1.4–9.7%；多次检测的回收率为83.6–99.9%，CV为2.9–10.6%。此外，AIE-FLIA和AuNPs-LFIA在检测Vip3Aa毒素方面也表现出良好的实用性和适用性。总体而言，这些多模式免疫测定方法既可用于实验室定量分析，也可用于农业样本中的快速现场筛查。

图形摘要

Vip3Aa毒素是一种源自苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）的杀虫蛋白，被广泛用于转基因作物中。为了进行农业监测，需要对Vip3Aa毒素进行灵敏的残留分析。本文制备了一种针对Vip3Aa毒素的单克隆抗体（mAb，H12-mAb）以及多克隆抗体（pAbs，Y26-pAbs），并测定了它们的结合亲和力（分别为1.34 × 10⁷ L/mol和6.35 × 10⁷ L/mol）。利用这一对抗体组合，我们开发了三种互补的检测方法：双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）用于常规定量分析，基于聚集诱导发射荧光微球（AIE）的荧光免疫测定（AIE-FLIA）以提高检测灵敏度，以及基于金纳米颗粒（AuNPs）的侧向流动免疫测定（AuNPs-LFIA）用于快速筛查。这些方法的检测限（LODs）分别为9.68 ng/mL（DAS-ELISA）、1.95 ng/mL（AIE-FLIA）和31.25 ng/mL（AuNPs-LFIA），远低于转基因组织中报道的Vip3Aa表达水平（> μg/g）。在代表性农业样本中验证了这些方法的性能，结果显示：单次检测的回收率为90.3–99.1%，变异系数（CV）为1.4–9.7%；多次检测的回收率为83.6–99.9%，CV为2.9–10.6%。此外，AIE-FLIA和AuNPs-LFIA在检测Vip3Aa毒素方面也表现出良好的实用性和适用性。总体而言，这些多模式免疫测定方法既可用于实验室定量分析，也可用于农业样本中的快速现场筛查。

图形摘要