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本研究评估了传统中药复方Gami-Guibitang (GBT)在丙戊酸(VPA)诱导的自闭症谱系障碍(ASD)小鼠模型中的作用。结果表明，GBT可显著减轻焦虑样行为，改善社交互动和学习记忆能力，其机制与调节海马体CREB-PI3K-Akt信号通路及GABAA受体亚基表达相关，而不通过外周炎症发挥作用，为ASD相关情绪失调提供了潜在的多靶点治疗新策略。
引言：背景与研究目的
自闭症谱系障碍(ASD)是一种以社交缺陷、重复行为和高度焦虑为特征的神经发育障碍。其中，焦虑作为一种常见且严重影响生活质量的共病症状，影响着高达40%-50%的ASD患者。目前，针对核心症状的有效干预措施仍然有限。丙戊酸(VPA)是建立ASD小鼠模型的常用致畸剂，可诱发类似ASD的行为和分子改变。传统中药复方Gami-Guibitang (GBT)源自归脾汤，临床用于改善焦虑、疲劳、注意力不集中等症状，但其对ASD相关异常的作用尚未在VPA诱导的模型中得到充分阐明。本研究旨在评估GBT在VPA诱导的ASD小鼠模型中减轻焦虑和调节神经功能的作用，重点探讨行为结果及海马体突触信号通路的分子机制。
研究方法：动物模型、给药方案与评估
1. 动物模型与给药
研究使用C57BL/6N小鼠，通过在胚胎期第12.5天对孕鼠单次腹腔注射VPA (500 mg/kg)诱导ASD模型，对照组则注射生理盐水。只使用雄性后代进行实验。动物在出生后第21天断奶，从断奶日开始，VPA暴露组小鼠接受GBT (150 mg/kg, 口服) 治疗，每天两次，持续4周。实验分为四组：生理盐水对照组(VC)、GBT正常处理组(VGBT)、VPA模型组(ASD)、VPA模型+GBT治疗组(AGBT)。
2. 行为学评估
在药物治疗期间，对小鼠进行了一系列行为学测试，以评估其行为表型。开放旷场实验用于评估基础运动活性；高架十字迷宫评估焦虑样行为；埋珠实验评估重复/焦虑相关行为；Y迷宫评估工作记忆和探索行为；三箱社交互动实验评估社交能力；而莫里斯水迷宫则用于评估空间学习记忆。
3. 生化与分子分析
行为测试后，收集小鼠海马体组织，通过蛋白质免疫印迹(Western Blot)分析关键突触信号蛋白的表达，包括磷酸化及总的CREB、GluR1、PI3K、Akt，以及GABAA受体亚基GABRA1和GABRB1，并使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。
研究结果：行为、分子与机制
1. 表型与生长参数
VPA暴露的小鼠出现了明显的尾部畸形。在生长方面，ASD模型组小鼠的体重显著低于对照组，而GBT治疗并未显著恢复其体重。然而，GBT处理显著增加了VPA暴露小鼠的脑重/体重比，表明其对大脑与身体的生长比例有调节作用。血清TNF-α水平在各组间无统计学显著性差异，提示外周炎症可能不是GBT作用的主要靶点。
2. 行为学改善
在行为层面，GBT展现出明确的效果。开放旷场实验中，各组总运动距离无差异，排除了药物引起镇静或过度兴奋的干扰。在高架十字迷宫中，ASD小鼠在开放臂的活动距离百分比显著降低，表现出明显的焦虑样行为，而GBT治疗显著增加了开放臂探索，有效减轻了焦虑。在埋珠实验中，ASD小鼠埋藏的珠子数量显著减少，这被解释为焦虑相关的行为抑制，GBT治疗则使其部分恢复正常。在三箱社交实验中，ASD小鼠在陌生鼠区域停留时间减少，表明社交趋近行为受损，GBT处理则显著增加了其在陌生鼠区域的探索时间，部分改善了社交缺陷。在认知方面，ASD小鼠在莫里斯水迷宫的逃避潜伏期延长，表现出空间学习障碍，GBT处理显著缩短了其逃避潜伏期，提高了学习效率。在Y迷宫中，ASD小鼠的自发交替率降低（工作记忆受损），总运动距离增加（探索行为异常），GBT处理部分改善了交替率，并降低了过度活动。
3. 分子机制探究
分子机制研究揭示了GBT对海马体突触信号的关键调控作用。研究发现，VPA暴露导致海马体中磷酸化CREB (p-CREB)、磷酸化GluR1 (p-GluR1)、磷酸化PI3K (p-PI3K)和磷酸化Akt (p-Akt)的水平异常升高，这表明CREB–PI3K/Akt信号通路发生了过度激活。GBT治疗显著逆转了这些蛋白的异常高磷酸化状态，使其表达趋于正常。同时，VPA暴露降低了GABAA受体α1亚基(GABRA1)的表达，而GBT处理使其显著增加，恢复到接近对照组的水平。有趣的是，GBT处理还使GABAA受体β1亚基(GABRB1)的表达超过了基线水平。脑源性神经营养因子(BDNF)的总蛋白水平在各组间没有显著差异。
讨论与结论：多靶点调控与潜在价值
综上所述，本研究为GBT改善ASD相关症状提供了临床前证据。在行为上，GBT能选择性地减轻VPA诱导的焦虑样行为、部分改善社交缺陷和空间学习障碍，而不引起行为抑制或影响基础运动能力。在分子层面，其作用机制并非简单的全局增强，而是对VPA诱导的异常突触信号（特别是CREB-PI3K-Akt通路）进行“校正”，并选择性地调节GABA能受体亚基的组成。这些发现表明，GBT可能通过调节海马体突触信号稳态，发挥其对ASD相关情绪和认知功能障碍的改善作用。鉴于目前ASD治疗药物的局限性，GBT作为一种多组分、多靶点的传统草药复方，为开发调节神经发育障碍相关情绪失调的新型治疗策略提供了有希望的候选方向。未来研究可进一步探索GBT对其他脑区（如前额叶皮层、杏仁核）的影响，以及其具体活性成分的药理作用。
