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本文通过建立青少年间歇性酒精暴露（AIE）的大鼠模型，并结合累积剂量下的酒精反应测试（ERB），系统阐明了青少年酗酒如何通过激活高迁移率族蛋白B1（HMGB1）介导的神经免疫通路，导致成年后对酒精产生持久的耐受性。研究进一步发现，通过HMGB1抑制剂甘氨酸甘草酸（glycyrrhizic acid）进行干预，可以有效逆转这种耐受性。这些发现不仅揭示了青少年酒精滥用增加成年后酒精使用障碍（AUD）风险的潜在免疫学机制，也为开发靶向HMGB1信号通路的新型AUD治疗策略提供了重要的实验依据。
引言
流行病学研究表明，青少年期的重度酗酒行为与未来发生酒精使用障碍（Alcohol Use Disorder, AUD）的风险显著相关。酒精耐受，即对酒精急性效应的反应性降低，是AUD的一个普遍认可的临床症状。然而，青少年期酗酒对成年后形成酒精耐受的直接贡献仍知之甚少。为了探究这种关联，研究者利用大鼠模型，对经历青少年间歇性酒精暴露（Adolescent Intermittent Ethanol, AIE）的成年雌性Wistar大鼠，在成年后通过一系列累积剂量的酒精挑战，系统评估了其行为学与生理学反应。
方法与材料
本研究使用了成年雌性Wistar大鼠。AIE处理组在出生后第25天（P25）至P54期间，以“两天给药、两天休息”的模式，通过胃内灌胃给予乙醇（5.0 g/kg）。对照组（CON）给予等体积的水。在AIE处理后，对大鼠在成年期（P75或P95）进行酒精反应测试（Ethanol Response Battery, ERB）。ERB是一种累积剂量-反应测试，评估指标包括：行为中毒评级、体温过低（hypothermia）、平衡能力（加速转棒实验，rotarod）、运动协调性（倾斜平面实验，tilting plane）以及翻正反射消失（Loss of Righting Reflex, LORR）。测试中，通过腹腔注射四剂累积剂量的乙醇（0.5, 0.5, 1.0, 1.0 g/kg），使总剂量分别达到0.5, 1.0, 2.0和3.0 g/kg，并在每次给药后15分钟进行各项指标的评估。
此外，研究还设置了两个补充实验。实验二旨在模拟AIE诱导的神经炎症，在P40时给予乙醇初治的大鼠单次腹腔注射脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS, 1.0 mg/kg），并在P80时进行ERB测试。实验三则在AIE处理后（从P56至P95），通过饮水给予HMGB1特异性抑制剂甘氨酸甘草酸（glycyrrhizic acid），以探究阻断HMGB1信号通路是否能逆转AIE诱导的酒精耐受。
在ERB测试中采集的血液样本，用于检测血液乙醇浓度（Blood Ethanol Concentrations, BECs）和血浆HMGB1水平。在实验三结束后，对大鼠脑组织（运动皮层）进行了免疫组织化学分析，检测HMGB1、晚期糖基化终产物受体（Receptor for Advanced Glycation End Products, RAGE）以及磷酸化的NF-κB p65（pNF-κB p65）的表达。
结果
3.1 青少年酗酒导致成年后持久的低酒精反应性
ERB测试结果显示，尽管AIE处理组和对照组大鼠的BECs在累积剂量下呈同等程度的增加，但AIE处理组在成年后表现出显著且持久的酒精耐受。具体表现为：
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中毒评级降低：在1.0、2.0和3.0 g/kg的乙醇剂量下，AIE组大鼠的中毒评分显著低于对照组。
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低体温反应减弱：AIE组大鼠在0.5、1.0、2.0和3.0 g/kg乙醇剂量下的体温下降程度显著低于对照组。
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运动协调性损伤减弱：在倾斜平面测试中，AIE组大鼠在1.0、2.0和3.0 g/kg剂量下的下滑角度更大，表明其运动协调性受损程度更轻。
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翻正反射消失减少：在最终3.0 g/kg剂量下，所有对照组大鼠均出现LORR，而AIE组中仅有一半大鼠出现LORR。
血浆HMGB1检测发现，成年AIE组大鼠的基线HMGB1水平是对照组的3.4倍。然而，在累积乙醇挑战过程中，对照组大鼠的血浆HMGB1水平呈剂量依赖性升高，而AIE组大鼠的HMGB1水平升高反应则显著减弱。这提示AIE不仅导致HMGB1的基础水平升高，还改变了机体对急性乙醇诱导HMGB1释放的反应性。
3.2 青少年神经免疫激活（LPS）模拟AIE效应，导致成年酒精耐受
为了直接验证神经免疫激活的作用，研究者在青春期给予大鼠单次LPS注射。结果显示，与AIE处理类似，青春期LPS暴露同样导致成年大鼠在ERB测试中表现出酒精耐受：
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中毒评级和低体温反应减弱：在特定剂量下，LPS组的中毒评分和体温下降程度均低于对照组。
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运动协调性损伤整体减轻：LPS组在倾斜平面测试中的表现整体优于对照组。
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血浆HMGB1反应减弱：在累积乙醇挑战中，LPS组大鼠血浆HMGB1水平的升高幅度在1.0、2.0和3.0 g/kg剂量下均显著低于对照组。
这些结果表明，青春期的神经免疫激活足以模拟AIE的效果，导致成年后出现类似的酒精耐受和减弱的HMGB1释放反应。
3.3 HMGB1抑制剂甘氨酸甘草酸逆转AIE诱导的成年酒精耐受
为了明确HMGB1信号通路在AIE诱导酒精耐受中的关键作用，研究者在AIE处理后立即给予HMGB1抑制剂甘氨酸甘草酸进行干预。结果发现：
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行为耐受被逆转：甘氨酸甘草酸处理完全逆转了AIE诱导的成年酒精耐受。具体来说，它使AIE组大鼠降低的中毒评分、减弱的低体温反应以及减轻的运动协调性损伤均恢复至对照组水平。
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基线HMGB1升高被抑制：甘氨酸甘草酸处理部分抑制了AIE引起的成年期基线血浆HMGB1水平升高。
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脑内神经炎症标记物表达被逆转：免疫组化分析显示，AIE导致成年大鼠运动皮层中HMGB1、其受体RAGE以及下游转录因子pNF-κB p65的表达均显著增加。而甘氨酸甘草酸处理能够有效逆转这些蛋白的上调，使其表达恢复至对照组水平。
讨论
本研究首次将促炎性HMGB1信号通路与青少年酗酒诱导的持久性成年酒精耐受联系起来。主要发现可归纳为三点：(1) 青少年间歇性酗酒会导致成年后对酒精的长期低反应性（即耐受）；(2) 促炎性神经免疫激活（无论是酒精直接诱导还是LPS模拟）参与了酒精耐受的发展；(3) 阻断HMGB1介导的促炎信号可以逆转AIE诱导的成年酒精耐受。
这些发现具有重要的科学意义。它们不仅为流行病学观察到的“青少年饮酒年龄是成年AUD风险因素”提供了直接的实验证据和可能的机制解释——即通过HMGB1介导的神经免疫通路诱导持久的酒精耐受，而且还揭示了一个潜在的治疗靶点。HMGB1抑制剂（如甘氨酸甘草酸）能够逆转这种耐受性，为开发针对AUD、特别是与早年饮酒史相关的AUD的新型治疗策略指明了方向。未来的研究需要进一步阐明HMGB1信号在特定脑区如何通过表观遗传等机制改变神经环路功能，从而导致酒精反应性的持久改变。
