《Antibodies》：Evaluation of Anti-dsDNA Antibodies in Laboratory Practice: Management of Different Analytical Methods and Correlation with HEp-2 Immunofluorescence Patterns
Massimo Papale,
Carmela Paolillo,
Loredana Iafelice,
Tiziana Trivisano,
Giuseppe Stefano Netti,
Elena Ranieri and
Gaetano Corso
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本文通过一项单中心回顾性研究，评估了三种检测方法（FEIA、免疫印迹、CLIFT）在测量抗dsDNA抗体方面的一致性，并将其结果与HEp-2细胞间接免疫荧光（IIF）模式相关联。研究发现，抗dsDNA抗体阳性可独立于HEp-2 IIF结果存在，其中35%的FEIA阳性患者HEp-2 IIF为阴性。研究结果表明，FEIA联合免疫印迹是可靠的检测策略，强调了在系统性红斑狼疮（SLE）血清学评估中采用多步骤诊断方案的必要性。
1. 引言
抗双链DNA（抗dsDNA）抗体是系统性红斑狼疮（SLE）的关键血清学标志物，但其检测结果的解读具有挑战性。这种挑战性一方面源于患者自身免疫反应的异质性，另一方面也与所采用分析方法的特性差异有关。尽管检测方法众多，但它们在抗体亲和力、抗原特异性和底物类型上存在显著不同。为了在保持高特异性的同时提高敏感性，学界建议采用分步诊断策略。本研究旨在评估不同检测方法测量抗dsDNA抗体结果的一致性，并将其与HEp-2细胞的免疫荧光模式进行关联分析，以期建立标准化的报告流程，尤其是在不同方法学结果不一致或抗dsDNA抗体阳性与预期荧光模式不匹配的情况下。
2. 材料与方法
这项回顾性研究在意大利福贾的一家医院病理科进行，共纳入了3090名接受抗dsDNA检测的连续患者。其中，138名通过荧光酶免疫测定法（FEIA）检测抗dsDNA抗体水平≥ 15 IU/mL的阳性患者被纳入研究主体。研究还设立了一个由29名抗体水平≤ 14 IU/mL的阴性患者组成的对照组。所有阳性患者根据抗体水平（低：15–25 IU/mL，中：26–49 IU/mL，高：>50 IU/mL）进行分层，并将其结果与HEp-2间接免疫荧光（IIF）的滴度和荧光模式进行关联分析。此外，研究还从阳性患者中选取了一个30人的子集，使用免疫印迹（IB）和Crithidia luciliae间接免疫荧光试验（CLIFT）重新评估了其抗dsDNA抗体水平，以进行方法学间的比较。
抗dsDNA抗体的定量血清检测使用EliA? dsDNA试剂盒在Phadia? 250全自动平台上进行，结果以国际单位/毫升（IU/mL）报告。抗核抗体（ANA）和抗dsDNA抗体的间接免疫荧光检测则分别在HEp-2细胞和Crithidia luciliae底物上进行，并使用HELIOS自动化系统进行分析与判读。免疫印迹分析则采用AESKUBLOTS?ANA-17 PRO系统，检测包括抗dsDNA、抗核小体、抗组蛋白在内的多种自身抗体。
3. 结果
3.1. 抗dsDNA抗体水平
在138名抗dsDNA阳性患者中，低水平、中等水平和高水平抗体的患者比例分别为45.6%、33%和21%。整体人群表现出较高的女性比例，但在高水平抗体组中，男女比例（1.07:1）更为均衡。
3.2. HEp-2荧光滴度与血浆抗dsDNA抗体水平的相关性
分析显示，抗dsDNA抗体水平随着HEp-2 IIF滴度的升高呈现上升趋势，但统计学上无显著关联。值得注意的是，在HEp-2 IIF阴性的患者中，仍有相当比例（19%）呈现高水平的抗dsDNA抗体。在HEp-2 IIF弱阳性和阳性患者中，分别有18%和25%呈现高抗体水平。这表明抗dsDNA抗体的高水平存在并不完全依赖于HEp-2 IIF的阳性结果。
3.3. 抗dsDNA抗体与HEp-2 IIF模式的相关性
在抗dsDNA抗体阳性的患者中，有35%的人HEp-2 IIF检测为阴性。在IIF阳性的患者中，观察到的主要荧光模式包括：均质型、细斑点型、粗斑点型、核仁型以及斑点伴阳性有丝分裂型等。这些发现提示，抗dsDNA抗体的存在并不总伴随特定的、经典的HEp-2 IIF核型。
3.4. 不同抗dsDNA检测方法阳性率比较
在30名患者的子集分析中，FEIA与免疫印迹在IIF阳性和阴性患者中均表现出高度一致性（分别为81%和100%）。相比之下，CLIFT与FEIA或免疫印迹的符合率较低（总体32%），且无论HEp-2 IIF结果如何，其符合率均不高。此外，在两名HEp-2 IIF阴性的患者中检测到了抗核小体抗体。
4. 讨论
本研究证实，在HEp-2 IIF阳性患者中，抗dsDNA抗体水平与荧光滴度存在正相关趋势，且观察到的主要荧光模式与文献报道一致。然而，一个关键的发现是，相当大比例（35%）的抗dsDNA阳性患者HEp-2 IIF检测为阴性，其中甚至包含19%的高抗体水平者。这种差异可能源于FEIA相较于IIF更高的分析灵敏度，以及不同方法学识别不同抗原表位的能力。FEIA和免疫印迹之间的高一致性支持了FEIA检测结果的可靠性，而CLIFT与其他方法之间的低符合率则凸显了不同方法学在表位识别上的差异可能对结果解读产生重要影响。研究还指出，抗核小体抗体可能作为另一个敏感的诊断标志物。
5. 结论
本研究表明，抗dsDNA抗体的检测可以独立于HEp-2 IIF的阳性结果而存在。荧光酶免疫测定法（FEIA），特别是当得到免疫印迹结果证实时，是评估抗dsDNA抗体的一种可靠方法。观察到的结果差异很可能反映了不同方法之间在表位识别和检测灵敏度上的不同。因此，在系统性红斑狼疮（SLE）的血清学评估中，采用一种结合了高灵敏度筛查和高特异性验证的多步骤诊断策略，将有助于提高诊断的准确性，并为临床医生提供更可靠的实验室依据。
