Si诱导的电子重构作用在基于Fe的催化剂上,促进了臭氧的快速活化,从而实现了高效的水净化

《Journal of Hazardous Materials》:Si-induced electron reconstruction on Fe-based catalyst drives rapid ozone activation for efficient water purification

【字体: 时间:2026年03月07日 来源:Journal of Hazardous Materials 11.3

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  PBAT废料通过定向进化获得的Tfcut-B3突变体表现出更高热稳定性和催化活性,能完全降解8/10种商业PBAT薄膜,产率达前体酶的2倍。研究证实Tfcut-B3在枯草芽孢杆菌中高效表达分泌,发酵液在72小时内可降解64.9mg PBAT,为规模化应用提供理论支撑。

  
张明良|丁芳慧|肖曦|程明根|洪青|严欣
中国农业部农业环境微生物学重点实验室,南京农业大学生命科学学院,江苏省南京市,中国

摘要

酶促降解是一种潜在的高效且环保的聚(丁酸丁二醇酯-对苯二甲酸乙二醇酯)(PBAT)废物回收和利用方法。然而,现有降解酶对多种实际商用PBAT薄膜的降解能力尚不明确,这阻碍了对其实用性的准确评估。在本研究中,通过定向进化Tfcut-DM获得了具有增强热稳定性和改善活性的突变PBAT降解酶Tfcut-B3。Tfcut-B3在48小时内完全将PBAT白色薄膜降解为对苯二甲酸(TPA),产出的TPA量分别是Tfcut-DM和Tfcut-DM(Q132Y)的2.0倍和1.3倍。Tfcut-B3在48小时内完全降解了8种商用PBAT基薄膜中的8种,剩余的2种(PB-6和PM-4)被分解成小片段;而Tfcut-DM无法完全降解任何一种薄膜。通过染色体整合在枯草芽孢杆菌中实现了Tfcut-B3的过表达和胞外分泌;在摇瓶发酵中,通过优化启动子和宿主,使Tfcut-B3的表达水平达到274 mg/L。Tfcut-B3在72摄氏度下,20毫升系统中可完全降解高达64.9毫克的PBAT白色薄膜。这些发现为PBAT降解酶的大规模应用提供了理论基础。

引言

聚(丁酸丁二醇酯-对苯二甲酸乙二醇酯)(PBAT)是最常见的可生物降解塑料之一[1]。这种共聚物是通过1,4-丁二醇(BDO)、己二酸(AA)和对苯二甲酸(TPA)的缩聚反应合成的,形成一种脂肪族-芳香族聚酯[2]。由于其优异的机械性能和独特的阻隔特性(如低水蒸气渗透性),PBAT被广泛用于食品包装、农业和食品服务行业[3],[4],[5]。基于PBAT的薄膜可用于改善土壤条件并提高作物产量[3],并且常用于购物袋和各种包装应用[4]。尽管PBAT在自然环境中可降解,但其固有的生物降解速率较慢[6];加之其生产和消费量的迅速增加,导致了大量PBAT废物的积累[7],[8],这对环境构成了严重挑战,凸显了亟需有效的废物管理策略来减轻其环境影响并促进可持续利用。加强回收工作可以减少废物积累、节约资源,并降低生产新塑料所产生的碳足迹。实施先进的回收技术和推广循环经济原则是实现可持续PBAT管理和确保这种环保材料长期可行性的关键步骤。
酶促降解是一种有前景且环保的解决方案,受到了越来越多的关注[9],[10],[11],[12],[13],[14],[15],[16],[17],[18],[19],[20]。来自Thermobifida fusca的工程化角质酶变体Tfcut-DM和Tfcut-DM(Q132Y)在PBAT降解方面表现出显著潜力,分别在36小时和24小时内实现了PBAT薄膜的完全降解[17],[21]。同样,来自Alternaria alternata FB1的角质酶变体AaCut10L209A/L216F在48小时内完全降解了PBAT薄膜[18],而工程化角质酶变体LCC-M1和DCTPC_4M_S122H分别在4小时和6小时内完全降解了PBAT薄膜[19],[20]。这些发现凸显了酶促PBAT降解的巨大工业潜力,有助于实现更可持续的废物管理实践。
目前,商用PBAT基塑料产品主要是复合材料,通常通过将PBAT与其他物质(如碳酸钙和滑石)混合,或结合成本效益高的天然聚合物(如淀粉、木质素和纤维素)以及可生物降解的聚合物(如聚乳酸(PLA)和聚丁酸丁二醇酯)来配制[22],[23],[24],[25]。然而,现有PBAT降解酶对这些产品的降解能力尚未进行评估。Tfcut-DM、AaCut10L209A/L216F和DCTPC_4M_S122H主要在PBAT薄膜上进行了测试,而LCC-M1则在PBAT薄膜和PBAT/PLA混合物制成的商用袋子上进行了评估[17],[18],[19],[20]。由于这些先前的研究仅限于一两种类型的商业产品,这些酶对实际PBAT塑料的有效性仍不清楚。
在本研究中,通过定向进化Tfcut-DM获得了一种具有增强热稳定性和酶催化活性的突变体Tfcut-B3。评估了Tfcut-B3对十种商用PBAT基产品的降解能力。通过染色体整合在枯草芽孢杆菌中实现了Tfcut-B3的胞外分泌,其发酵上清液可直接用于PBAT的降解。这些结果强调了在现有发酵设施中直接应用PBAT水解酶的可行性,这对推进PBAT的生物降解和回收具有重要意义。

部分摘录

化学物质和菌株

p-硝基苯酚乙酸酯(pNPA)、p-硝基苯基棕榈酸酯(pNPP)和对苯二甲酸(TPA)购自Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.(中国上海)。Zeocin(Zeo)和spectinomycin(Spc)购自Sangon Biotech Co., Ltd.(中国上海)。PBAT白色薄膜(厚度:0.008毫米)购自上海鸿瑞生物科技有限公司(中国上海),其脂肪族(丁酸丁二醇酯)与芳香族(对苯二甲酸丁二醇酯)单元的摩尔比约为53:47,

突变体Tfcut-B3的定向进化与功能表征

为了通过定向进化提高Tfcut-DM对PBAT的催化活性,开发了一种高通量筛选方法以快速鉴定Tfcut-DM突变体(图S1A)。该方法利用了PBAT作为不溶性大分子聚合物无法进入微生物细胞的事实,而枯草芽孢杆菌可以利用信号肽将降解酶分泌到细胞外。产生能够降解PBAT的活性突变酶的菌落会形成清晰的晕圈,从而实现快速可视化

结论

本研究鉴定出一种具有增强热稳定性和PBAT降解活性的突变酶Tfcut-B3。Tfcut-B3的表现优于之前的变体(Tfcut-DM和Tfcut-DM(Q132Y),在48小时内完全降解了8种商用PBAT产品。相比之下,PB-6和PM-4的降解性能较差,这归因于它们的厚度以及PLA和淀粉等额外添加剂的存在。在枯草芽孢杆菌中实现了Tfcut-B3的过表达

环境影响

聚(丁酸丁二醇酯-对苯二甲酸乙二醇酯)(PBAT)作为一种常见的可生物降解塑料,由于其缓慢的环境降解速度而成为废物。本研究通过工程化Tfcut-B3(一种高效的降解酶)提供了一种绿色的酶促回收解决方案,该酶能将多种商用PBAT薄膜降解为可重复使用的单体。Tfcut-B3可以通过微生物发酵大规模生产,其培养上清液可直接用于降解PBAT薄膜,为PBAT的管理提供了实用的基础

CRediT作者贡献声明

丁芳慧:资源提供、数据分析。 张明良:初稿撰写、研究调查、数据分析。 肖曦:数据分析。 洪青:撰写、审稿与编辑、监督。 程明根:监督、方法学研究。 严欣:撰写、审稿与编辑、监督、项目管理、资金获取。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了国家重点研发计划(2024YFD1701002)和国家自然科学基金(32270127、32170126、32400085)的财政支持。
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