《Microbiology Spectrum》：Performance of the LDBio Aspergillus ICT lateral flow assay and western blot for diagnosing chronic pulmonary aspergillosis in post-tuberculosis patients: a prospective study from South India
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本项来自印度南部的诊断准确性研究表明，在肺结核后持续呼吸道症状的患者群体中，慢性肺曲霉病（CPA）的患病率高达81%。研究发现，LDBio曲霉免疫层析法（ICT）和免疫印迹法（WB）是强大的诊断工具，两者联用可提供最优的诊断准确性（87.1%）。WB在血清阴性CPA（<10 AU/mL）中显示出更高的检出率。该研究为结核高负担、资源有限地区优化CPA诊断流程提供了有力证据。
研究背景与目的
慢性肺曲霉病（Chronic Pulmonary Aspergillosis, CPA）是一种主要由曲霉属（特别是烟曲霉）引起的进展性、破坏性肺部疾病。它常发生于已有结构性肺异常（如已愈合的肺结核）的个体中。在全球，CPA病例估计超过300万，其中约120万是肺结核的后遗症。印度作为结核高负担国家，每年估计有30万新发CPA病例，但该病由于临床认识不足、影像学表现重叠以及诊断工具受限，常常被漏诊或误诊。CPA的诊断需要结合慢性呼吸道症状、特征性影像学发现以及曲霉感染的微生物学或免疫学证据。其中，检测曲霉特异性抗体（尤其是IgG）是诊断的核心。经典的检测方法（如免疫扩散法）存在周转时间长、重复性差等问题。酶联免疫吸附试验等商业试剂盒的性能在不同平台间差异显著，限制了其在资源有限地区的常规使用。LDBio曲霉免疫层析法是一种快速、床旁替代方案，而曲霉免疫印迹法则可检测多种关键抗原。本研究旨在评估这两种检测方法在印度南部肺结核后患者中诊断CPA的表现。
材料与方法
这项前瞻性研究于2023年7月至2025年6月在印度班加罗尔进行。研究招募了年龄≥18岁、有经微生物学证实的肺结核病史、并在完成抗结核治疗后仍存在持续性呼吸道症状的成人患者。诊断CPA采用修改后的欧洲临床微生物与传染病学会/欧洲医学真菌学联盟/欧洲呼吸学会标准。所有参与者都接受了全面的临床评估、胸部高分辨率CT、以及呼吸道分泌物的直接镜检和培养。血清学检测包括曲霉特异性IgG酶联免疫吸附试验、ICT、WB和半乳甘露聚糖（GM）抗原检测。研究共纳入132名肺结核后患者，其中107名（81%）被归类为CPA，25名为非CPA。另外还包括了70份对照血清。
结果
在患者特征方面，CPA患者中位年龄为50岁，男性占多数。吸烟和饮酒在CPA患者中更为常见。最常见的临床症状是咳嗽、呼吸困难和咯血。在影像学上，真菌球和结节在CPA患者中显著更常见。实验室检查方面，CPA患者的嗜酸性粒细胞计数略高。真菌培养在85.9%的CPA患者中呈阳性，其中曲霉属分离率为79.8%。在血清学检测中，ICT和WB在CPA病例中的阳性率分别为73.8%和84.1%，优于酶联免疫吸附试验（68.2%）和血清GM（30%）。
在诊断性能方面，WB显示出最高的敏感性（84.1%， 95% CI: 75.8–90.5），而ICT和GM则显示出最高的特异性（均为94.7%， 95% CI: 88.1–98.3）。将ICT和WB结合使用，敏感性显著提高至95.8%，诊断准确性也提高到87.1%（95% CI: 81.7–91.4），并获得了最高的区分能力（约登指数0.805）。GM的敏感性（30%）和准确性（58%）均较低。在血清学阳性（IgG ≥10 AU/mL）的CPA中，WB的敏感性（98.6%）高于ICT（93.2%）。在血清学阴性的CPA中，两种检测的敏感性均下降，但WB（53%）仍高于ICT（32.4%）。在培养阳性病例中，WB的敏感性也显著高于ICT。
在CPA亚型分析中，慢性空洞性肺曲霉病占大多数。WB在不同亚型中均保持高敏感性。WB显示出清晰的条带分化模式，16 kDa、18-20 kDa、22 kDa和30 kDa条带被认为是曲霉致敏的特异性标志物。在血清学阳性的CPA中，多条带（4条）反应性更为常见，表明强烈的多抗原识别。WB的整体反应强度在血清学阳性CPA中最高。
在检测方法一致性方面，ICT和WB在所有血清样本中表现出高度一致性（κ = 0.82）。WB在检测曲霉特异性抗体方面的敏感性显著高于酶联免疫吸附试验。潜在类别分析估计，ICT的敏感性为92%（95% CI: 84–97），特异性为94%（95% CI: 88–98）；WB的敏感性为87%（95% CI: 77–94），特异性为91%（95% CI: 83–96）。
在治疗和结局方面，78%的CPA患者接受了伊曲康唑抗真菌治疗，死亡率仅为0.9%，反映出及时适当的治疗带来了良好的结局。
讨论与结论
本研究首次在印度评估了LDBio曲霉免疫印迹法在CPA诊断中的性能。结果表明，LDBio ICT和WB在诊断肺结核后患者的CPA方面均非常有效，包括血清学阴性的病例。两者联合使用可显著提高诊断准确性。WB改善了在血清学阴性和非烟曲霉感染中的检出率，突显了其在复杂病例中的实用性。清晰的条带图谱和强度模式进一步支持WB作为反映宿主对曲霉抗原免疫反应的半定量工具。相比之下，血清和肺泡灌洗液GM不应作为CPA的主要诊断工具。将这两种检测方法整合到肺结核后肺病诊疗路径中，有望显著改善CPA的诊断，减少抗真菌治疗的延误，并减轻结核流行地区的长期疾病负担。本研究的结果为高风险人群的标准化血清学诊断策略提供了参考。
