《International Journal of Endocrinology》：LncRNA VCAN-AS1 Sponges miR-374c-3p to Promote Proliferation, Invasion, Migration, and EMT in Thyroid Cancer
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本研究揭示了长链非编码RNA VCAN-AS1 (lncRNA VCAN-AS1) 在甲状腺癌(TC)进展中的促癌机制。研究发现，TC中VCAN-AS1显著上调，其可作为竞争性内源RNA (ceRNA) 吸附miR-374c-3p，从而促进癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化(EMT)进程。体内外实验共同验证了该轴是调控TC发展的重要途径，为TC的分子靶向治疗提供了新视角。
文章内容归纳
引言
甲状腺癌是全球最常见的内分泌系统恶性肿瘤，其发病率在全球范围内持续上升。其中，甲状腺乳头状癌是最主要的亚型。尽管多数患者预后良好，但部分患者仍会发生淋巴结或远处转移，导致复发或死亡。因此，探究甲状腺癌发生发展的分子机制，寻找新的治疗靶点至关重要。
长链非编码RNA是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA分子，在多种生物学过程中扮演重要角色，并在众多癌症中作为关键调控因子发挥作用。VCAN反义RNA1 (VCAN-AS1) 是位于染色体5q14.3位点的一个lncRNA，既往研究表明其在胃癌、乳腺癌等肿瘤中发挥促癌作用。然而，VCAN-AS1在甲状腺癌中的功能尚不明确。
上皮-间质转化是肿瘤侵袭和转移的关键过程，与肿瘤的转移潜能密切相关。EMT的特征包括上皮标志物E-钙粘蛋白表达下调，以及间质标志物N-钙粘蛋白、波形蛋白等表达上调。本研究旨在探讨lncRNA VCAN-AS1在甲状腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT相关蛋白表达中的作用，并阐明其潜在分子机制。
结果
1. 差异表达lncRNA的分析与验证
通过对甲状腺癌组织与癌旁组织进行lncRNA测序，筛选出大量差异表达的lncRNA。其中，VCAN-AS1、LINC01614、TMEM92-AS1和lncRNA CRNDE在癌组织中显著上调，而LINC00261和MPPED2-AS1显著下调。RT-qPCR结果验证了测序数据，并特别指出VCAN-AS1在甲状腺癌中的上调变化尤为显著，提示其可能在甲状腺癌发生发展中扮演重要角色。
2. VCAN-AS1对甲状腺癌细胞功能的影响
在甲状腺癌细胞TPC-1、BCPAP和K1中，VCAN-AS1的表达均高于正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1，其中在BCPAP细胞中表达最高。功能获得与缺失实验表明：
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过表达VCAN-AS1可显著促进TPC-1和BCPAP细胞的增殖、侵袭和迁移能力。
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敲低VCAN-AS1则抑制了这些细胞的恶性表型。
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在EMT相关蛋白表达方面，过表达VCAN-AS1导致上皮标志物E-钙粘蛋白表达下调，间质标志物N-钙粘蛋白、波形蛋白以及EMT相关转录因子Slug、Snail表达上调，促进了EMT进程。而沉默VCAN-AS1则产生相反效果。
3. VCAN-AS1的ceRNA机制探索：靶向miR-374c-3p
为探究VCAN-AS1的作用机制，研究人员对VCAN-AS1过表达的甲状腺癌细胞进行了miRNA测序，发现miR-374c-3p是差异最显著的miRNA之一。GO和KEGG通路富集分析预测，miR-374c-3p的靶基因参与细胞组分、信号转导、癌症相关通路等多种生物学过程。
进一步实验证实：
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VCAN-AS1的过表达可下调miR-374c-3p的表达，而其沉默则上调miR-374c-3p的表达。
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双荧光素酶报告基因实验证实，VCAN-AS1与miR-374c-3p存在直接结合位点，两者可特异性结合。
4. VCAN-AS1通过miR-374c-3p调控甲状腺癌恶性行为
为验证VCAN-AS1是否通过吸附miR-374c-3p发挥功能，研究在VCAN-AS1过表达的细胞中共转染miR-374c-3p模拟物。结果显示，过表达miR-374c-3p能够部分逆转VCAN-AS1对甲状腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的促进作用，并能抑制VCAN-AS1诱导的EMT蛋白表达变化（即上调E-钙粘蛋白，下调N-钙粘蛋白、波形蛋白、Slug和Snail）。这证明VCAN-AS1主要通过充当miR-374c-3p的“海绵”，解除miR-374c-3p对其下游靶基因的抑制作用，从而驱动甲状腺癌进展。
5. 体内实验验证
在裸鼠皮下移植瘤模型中，过表达VCAN-AS1显著促进了肿瘤的生长（体积和重量增加）。而在VCAN-AS1过表达的基础上，再给予miR-374c-3p模拟物，则能有效抑制肿瘤的生长。对瘤体组织的分析显示，VCAN-AS1过表达组中miR-374c-3p水平降低，EMT相关蛋白表达变化趋势与体外实验结果一致；而联合miR-374c-3p过表达则可逆转这些变化。体内实验有力地支持了体外研究的结论。
结论
本研究系统阐明了长链非编码RNA VCAN-AS1在甲状腺癌中的促癌作用及其分子机制。VCAN-AS1在甲状腺癌中高表达，其通过竞争性结合miR-374c-3p，解除miR-374c-3p的肿瘤抑制功能，从而促进甲状腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化进程。该VCAN-AS1/miR-374c-3p调控轴的发现，为深入理解甲状腺癌的发病机制提供了新见解，并可能为甲状腺癌的分子诊断和靶向治疗提供潜在的候选靶点。
