编辑推荐：
这篇研究评估了通过7NB-mRNAs（包括CRMP1、DBH、DDC、GAP43、ISL1、PHOX2B和TH）检测高危神经母细胞瘤（NB）患者骨髓最小残留病（BM-MRD）在不同治疗时点的预后价值。研究发现，在高剂量化疗后（EOH）和巩固治疗结束时（EOC）检测到的BM-MRD水平与复发风险显著相关，且这两个时点的评估可有效预测患者3年无事件生存率（EFS）。
引言
神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤，约占儿科癌症的8-10%和癌症相关死亡的15%。在日本，每年有超过150名儿童新确诊。该肿瘤起源于神经嵴衍生的交感神经系统细胞，表现出显著的临床和生物学异质性。新诊断的患者根据临床和生物学预后因素被分为低、中、高危组。高危神经母细胞瘤的长期生存率仍低于60%，超过一半的患者会出现复发，这很可能由骨髓中对化疗耐药的微小残留疾病所驱动。
尽管通过定量PCR和液滴数字PCR检测不同但部分重叠的NB相关mRNA组合在多个时点已显示出显著的预后价值，但最优的MRD标志物组合和评估时机仍不明确。本研究旨在通过7NB-mRNAs检测，评估高危神经母细胞瘤患者在四个关键治疗时点骨髓中MRD的临床意义。
材料与方法
本研究纳入了30名高危神经母细胞瘤患者，在四个时间点共收集了89份骨髓样本，包括诊断时、诱导治疗结束时、高剂量化疗结束时以及巩固治疗结束时。所有患者均接受日本标准的高危治疗方案。通过7NB-mRNAs液滴数字PCR检测方法，定量骨髓样本中CRMP1、DBH、DDC、GAP43、ISL1、PHOX2B和TH mRNA的表达水平。统计分析包括比较组间差异、绘制受试者工作特征曲线评估预测效能，以及采用Kaplan-Meier法分析无事件生存率和总生存率。
结果
患者特征与样本可及性
纳入的30名患者具有典型的高危特征。在随访期间，共发生20例复发事件和13例死亡。估计的3年无事件生存率和总生存率分别为50.0%和66.2%。
BM-MRD在四个治疗时点的动态变化
研究发现，每个NB-mRNA和7NB-mRNAs的总水平随着治疗进程而逐渐降低。在所有分析样本中，7NB-mRNAs的检出率为100%，显著高于单个NB-mRNA的检出率，证明了其检测BM-MRD的优越性。
复发与BM-MRD在各时点的关联
对比无复发与复发患者的BM-MRD水平，发现在诊断时和诱导治疗结束时，差异无统计学意义。然而，在高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时，复发患者的BM-MRD水平显著更高。ROC曲线分析进一步证实，高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时BM-MRD的区分能力具有显著准确性。
基于EOH和EOC时点BM-MRD的生存分层
根据ROC分析，将高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时的BM-MRD截断值设定为3.5，将患者分为高MRD组和低MRD组。Kaplan-Meier分析显示，在高剂量化疗结束时，高BM-MRD组患者的3年无事件生存率显著低于低BM-MRD组。在巩固治疗结束时，高BM-MRD组同样表现出显著更差的无事件生存率和总生存率。这些结果表明，高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时的BM-MRD水平对临床结局有显著影响。
讨论
本研究首次证明了在高危神经母细胞瘤患者中，高剂量化疗结束时检测到的BM-MRD具有显著的预后价值。这个时点的样本采集于高剂量化疗和自体外周血干细胞移植后造血功能恢复时，其预后影响提示，即使经过清髓性高剂量化疗，导致复发的肿瘤细胞仍可能存在于骨髓微环境中。巩固治疗结束时的BM-MRD也与患者预后显著相关，这与部分先前研究的结果一致，但也存在不一致的报道。而在诊断时和诱导治疗结束时，本研究未发现BM-MRD有显著的预后意义，这可能是由于患者队列、治疗方案和MRD标志物的差异所致。
本研究数据表明，通过7NB-mRNAs表达的BM-MRD检测能有效预测高危神经母细胞瘤患者的复发风险，其中高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时是最具信息量的评估时点。临床上，这两个时点可能特别有助于对高危患者进行分层，以优化巩固后治疗策略。然而，本研究也存在局限性，包括患者和样本数量较少，以及治疗方案的异质性，特别是巩固后治疗并非统一作为一线治疗。
结论
总之，本研究通过分析四个治疗时点的BM-MRD临床意义，揭示了高剂量化疗结束时和巩固治疗结束时是通过7NB-mRNAs表达检测BM-MRD的预后评估关键时点。值得注意的是，较早的高剂量化疗结束时点可能为BM-MRD评估提供了更优的时机，对未来研究具有重要指导价值。
