通过划痕试验评估伤口愈合潜力以及Jacaranda ovalifolia R. Br.花朵中新的黄酮苷类化合物的作用

《South African Journal of Botany》：Wound healing potential by scratch assay and new flavone glycoside of Jacaranda ovalifolia R. Br. flowers

在体外伤口愈合实验中，首次证实了埃及 Jacaranda ovalifolia 花朵总乙醇提取物（TEEJOF）及其组分对 WI-38 肺成纤维细胞的促愈合作用，48 小时闭合率达 91.51%。通过色谱和谱学技术鉴定了 14 种化合物，包括首个分离的 apigenin 7-O-α-D-葡萄糖uronide 6′-乙酯（新化合物 14）及 13 种已知成分，其中 4 种化合物（n- heptacosanoic acid 等）首次从 Bignoniaceae 科或 Jacaranda 属中分离。

　　

Sara Abd-Eltawab Makhlouf Mohammad、Miada Fouad Abdelwahab、Mamdouh Nabil Samy、Katsuyoshi Matsunami、Ashraf Nageeb Elsayed Hamed

埃及米尼亚大学药学院药用植物学系，邮编61519

摘要

对药用植物中提取的天然产物的鉴定和评估促进了多种药物的开发，这些药物可以治疗包括慢性伤口在内的多种疾病。因此，本研究首次使用伤口划痕试验方法，探讨了Jacaranda ovalifolia花的总乙醇提取物（TEEJOF）及其不同组分对正常肺成纤维细胞（WI-38）的体外伤口愈合潜力。结果显示，经过48小时后，TEEJOF的伤口闭合率为91.51 ± 6.06%，优于未经处理的对照组细胞以及其他组分处理的细胞。该结果在统计学上与阳性对照β-sitosterol（伤口闭合率为92.72 ± 4.76%）相当。此外，对TEEJOF的植物化学分析分离出一种新的黄酮类糖苷——apigenin 7-O-α-D-glucuronide 6′'-ethyl ester（14），同时还分离出了13种已知化合物：4-(hydroxyl methyl)-1H-pyrazol-3-ol（5）、n-heptacosanoic acid（7）和n-hexatriacontane（9），这些化合物均为首次从Bignoniaceae科植物中分离出来；而24-methylenecycloartanol（3）、n-octacosanoic acid（4）和n-tetracosane（6）则是首次从Jacaranda属植物中分离出来的；stigmasterol（2）、β-sitosterol 3-O-β-glucopyranoside-6′-O-palmitate（8）和apigenin（13）则是首次从J. ovalifolia中分离出来的。最后，β-sitosterol（1）、oleanolic acid（10）、ursolic acid（11）和jacaranone ethyl ester（12）此前也已从该植物中分离出来。这些化合物的结构通过1D和2D核磁共振（NMR）实验以及质谱技术得到了确认。由于TEEJOF具有显著的愈合活性，它可能在发现新的天然愈合剂方面发挥作用。

引言

皮肤被认为是人体最大的重要器官，它保护内脏器官免受损伤和微生物感染（Bolla等人，2019年）。伤口通常由割伤或皮肤上的开口引起，可能是由于创伤、烧伤、感染或长期疾病导致的，这些情况会干扰皮肤的正常结构和功能（??ci和Aytac，2020年）。已知有许多类型的伤口会导致皮肤损伤或功能障碍，包括压疮、撕裂伤、褥疮、烧伤和穿刺伤，这些都会严重影响人的健康和生活质量，导致剧烈疼痛、残疾甚至死亡（Boshra等人，2023年）。伤口愈合过程对于恢复受损组织和维持组织稳态至关重要（Bolla等人，2019年）。伤口愈合过程非常复杂，包括多个步骤，如肉芽组织形成、炎症反应、血管生成、再上皮化和细胞外基质重建（Bolla等人，2019年）。炎症阶段的特点是血管反应，包括血液凝固、止血以及白细胞浸润等细胞事件，这些过程在抗菌和细胞因子释放中起着重要作用。上皮组织形成以覆盖伤口表面，同时肉芽组织生长以填充伤口空间。肉芽组织的形成涉及胶原蛋白和其他细胞外基质的沉积、成纤维细胞的增殖以及新血管的形成。因此，伤口内新组织的形成有助于恢复组织的结构完整性和功能（Batalha等人，2022年；Li等人，2007年）。 鉴于化学药物的严重副作用和高成本，研究能够促进伤口愈合的新分子变得十分必要。近年来，使用天然产物来治疗伤口的情况显著增加，例如naringenin和β-sitosterol（Abbas等人，2019年）。药用植物含有丰富的黄酮类和其他酚类化合物，这些化合物具有显著的抗氧化活性，因此被认为是有前景的伤口愈合剂，因为自由基的积累会阻碍伤口愈合过程（Edwin等人，2008年）。此外，植物提取物中含有高水平的脂肪酸和酚类化合物，这些化合物也表现出显著的抗炎作用，从而加速伤口愈合。例如，Argania spinosa的种子油由于含有不饱和脂肪酸和酚类化合物而表现出显著的伤口愈合和抗炎效果（Dakiche等人，2017年）。 在这方面，Bignoniaceae科植物是天然伤口愈合剂的有希望的来源。例如，Fridericia chica在民间医学中被用作多种用途的愈合剂和抗炎药物（Torres等人，2018年）。进一步的研究证明F. chica的叶提取物具有抗氧化、抗炎和伤口愈合特性（Batalha等人，2022年）。此外，从Bignonia binata叶的总乙醇提取物的EtOAc和水相组分中分离出了O-和三种C-黄酮类糖苷：chrysoeriol 7-O-β-D-glucopyranoside、apigenin-6,8-di-C-β-D-glucopyranoside、luteolin 6,8-di-C-β-D-glucopyranoside和apigenin 6-C-α-L-arabinopyranosyl-8-C-β-D-glucopyranoside。这些化合物在DPPH和phosphomolybdate试验中显示出较高的抗氧化能力。对分离出的黄酮类糖苷与SARS-CoV-2 Mpro的分子对接模拟显示了它们的高结合亲和力和对抗COVID-19的治疗潜力（Hamed等人，2021年）。 此外，属于Jacaranda属的植物也表现出愈合特性。最近，J. decurrens叶的乙醇提取物显示出显著的体内伤口愈合活性，这可能归因于其中含有的黄酮类化合物（如kaempferol 3-O-rutinoside、quercetin和kaempferol）以及三萜类化合物（如arjunolic acid和单宁）（Mohammad等人，2025年；Serra等人，2020年）。 Jacaranda ovalifolia R. Br. [同义词：Jacaranda mimosifolia D. Don]是一种广受欢迎的世界热带和亚热带地区的观赏树。南非的比勒陀利亚因其公园、街道两旁广泛种植的Jacaranda mimosifolia（Bignoniaceae）树木而被称为“Jacarandas之城”。春季时，这座城市会被一片美丽的紫色“毯子”覆盖，吸引了游客和当地居民的关注（Coetzee等人，2015年）。 因此，本研究首次使用伤口划痕试验方法探讨了J. ovalifolia花的总乙醇提取物（TEEJOF）及其衍生物的伤口愈合活性，并对其进行了植物化学分析，采用了多种色谱和光谱技术。

实验程序概述

一般实验步骤

实验中使用的溶剂包括甲醇（MeOH）、乙醇（95% EtOH）、乙酸乙酯（EtOAc）、轻质石油醚（pet. ether，60–80 °C）和二氯甲烷（DCM），以及蒸馏水。光学旋转数据是在JASCO P-1030偏振仪上测量的。紫外光谱是在Spectronic Genesys 2 PC紫外分光光度计上获得的。红外光谱是在Horiba FT-710傅里叶变换红外分光光度计上获得的。

通过MTT试验评估TEEJOF对正常WI-38细胞的细胞毒性

在伤口愈合研究之前，首先对所有样品进行了细胞毒性评估，以检测其对正常人肺成纤维细胞（WI-38）的毒性，从而筛选出可能影响其生物学相关性的毒性，并确定用于伤口愈合试验的最合适和安全的浓度。 TEEJOF及其衍生物的细胞毒性在31.25–1000 μg/mL的浓度范围内通过MTT试验进行了评估。

结论

本研究的主要目的是通过划痕试验评估J. ovalifolia花的体外愈合活性，并研究其植物成分。本研究首次记录了TEEJOF及其不同组分的体外伤口愈合潜力。与未经处理的对照组细胞相比，用TEEJOF处理的WI-38细胞在48小时后的伤口闭合程度和迁移速率有所加快。

资金来源

作者未获得任何用于本研究、撰写和/或发表本文的财务支持。

CRediT作者贡献声明

Sara Abd-Eltawab Makhlouf Mohammad：项目管理、研究、数据分析、概念构思。Miada Fouad Abdelwahab：写作 – 审稿与编辑、监督、数据分析、概念构思。Mamdouh Nabil Samy：写作 – 审稿与编辑、监督、资源提供、方法论设计、数据分析、概念构思。Katsuyoshi Matsunami：方法论设计、研究。Ashraf Nageeb Elsayed Hamed：写作 – 审稿与编辑、监督、数据分析。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益冲突或个人关系可能会影响本文的研究结果。