《Current Issues in Molecular Biology》：Circulating MicroRNA Profiling for Phenotypic Stratification in Patients with Metabolic Dysfunction-Associated Fatty Liver Disease: A Candidate-Based Study
Sumbal Nida,
Dilshad Ahmed Khan,
Muhammad Amjad Pervez,
Nayyar Chaudhry,
Mohammad Qaiser Alam Khan and
Alveena Younas
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这项研究揭示了循环微小RNA（miRNA）谱在代谢功能障碍相关脂肪肝病（MAFLD）表型分型中的潜力。通过评估8种候选miRNA（miR-122, -103a, -222, -15a, -34a, -192, -197, -99a）在393名MAFLD患者和109名对照者中的表达，研究确定了与T2D-MAFLD、OB-MAFLD和L-MAFLD三种表型特异性相关的miRNA标记。将这些miRNA标记与常规生化标志物整合，可显著提高对MAFLD不同亚型的早期、无创诊断准确率，为个体化疾病管理提供了有前景的新工具。
摘要
代谢功能障碍相关脂肪肝病（MAFLD）是一种与代谢紊乱密切相关的肝脏疾病，新定义涵盖了三种临床表型：2型糖尿病相关MAFLD（T2D-MAFLD）、肥胖相关MAFLD（OB-MAFLD）和瘦型MAFLD（L-MAFLD）。由于疾病进展、纤维化风险和治疗反应存在显著差异，开发能够实现早期、无创、表型特异性诊断的工具是当前临床的迫切需求。本研究旨在评估一组血浆微小RNA（miRNA）作为生物标志物，在早期诊断和区分MAFLD不同表型方面的潜力。
1. 引言
MAFLD的三种表型具有异质性。T2D-MAFLD常伴随纤维化快速进展和肝细胞癌风险；OB-MAFLD最为常见，与中心性肥胖密切相关；而L-MAFLD虽体重指数（BMI）正常，但依然面临相当的肝脏和全身性风险。循环miRNA因其在体液中的稳定性以及与代谢、炎症、纤维化等病理过程的紧密关联，被视为极具潜力的无创诊断标志物。既往研究已提示，miR-122调控肝细胞脂质合成，miR-103a与胰岛素抵抗相关，miR-34a参与肝细胞凋亡，而miR-99a、miR-197则呈现下调趋势。然而，这些miRNA在区分不同MAFLD表型方面的能力尚不明确。本研究通过候选miRNA策略，系统评估了它们在表型特异性诊断中的价值。
2. 材料与方法
本研究在2021年11月至2024年3月期间进行，共纳入393名MAFLD患者和109名健康对照。患者根据脂肪肝指数（FLI）≥ 30、超声证实的肝脂肪变以及特定的代谢标准（T2D、肥胖或BMI正常但满足代谢失调条件）被分为T2D-MAFLD、OB-MAFLD和L-MAFLD三组。从血浆中提取RNA，通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测了8种候选miRNA（miR-122, -103a, -222, -15a, -34a, -192, -197, -99a）的表达水平，并以cel-miR-39-3p作为外源对照进行标准化。统计分析包括多变量比较、多因素逻辑回归和受试者工作特征（ROC）曲线分析，以评估单个及组合miRNA的诊断效能，并将其与常规生化标志物（如甘油三酯、高敏C反应蛋白、细胞角蛋白-18、胰岛素抵抗稳态模型评估、纤维化-4指数等）整合。
3. 结果
3.1. miRNA在MAFLD患者与对照中的差异表达
与健康对照组相比，MAFLD患者血浆中miR-122、miR-103a、miR-222、miR-15a和miR-34a的表达水平显著上调，而miR-197和miR-99a的表达则显著下调。miR-192在两组间无显著差异。
3.2. MAFLD不同表型间的miRNA表达谱
进一步比较三种表型发现，miR-122和miR-222在OB-MAFLD中上调幅度最大，miR-103a和miR-34a在T2D-MAFLD中表达最高，而miR-15a则在L-MAFLD中特异性高表达。相反，miR-197在T2D-MAFLD中下调最为明显，miR-99a在OB-MAFLD中下调最甚。miR-192在L-MAFLD患者中表达较其他表型降低。
3.3. miRNA表达与表型关联的多项逻辑回归分析
经年龄校正的多项逻辑回归分析揭示了miRNA与特定表型的独立关联。较高的miR-103a和miR-34a表达与T2D-MAFLD独立相关，而较低的miR-197也增加了T2D-MAFLD的可能性。OB-MAFLD与miR-122、miR-103a、miR-222的高表达以及miR-99a的显著低表达相关。高表达的miR-15a是L-MAFLD的独立关联因子。
3.4. 单个与组合miRNA特征的诊断性能
ROC曲线分析显示，单个miRNA在不同表型中表现出各异的诊断效能。在T2D-MAFLD中，miR-197的曲线下面积（AUC）最高，为0.784。在OB-MAFLD中，miR-99a的AUC高达0.869。而在L-MAFLD中，miR-15a表现出优异的区分能力，AUC为0.776。
3.5. 整合miRNA与生化标志物提升诊断模型效能
构建表型特异性组合miRNA面板（T2D-MAFLD: miR-103a, -34a, -197； OB-MAFLD: miR-122, -222, -99a； L-MAFLD: miR-15a, -197）显著提升了诊断准确率，AUC分别达到0.805、0.876和0.786。更重要的是，将miRNA面板与常规生化标志物模型整合后，诊断性能得到进一步大幅提升。对于T2D-MAFLD，组合模型的AUC从生化标志物模型的0.744提高到0.855。对于OB-MAFLD，AUC从0.708提升到0.890。对于L-MAFLD，生化标志物模型本身具有较高的区分度（AUC 0.855），整合miR-15a后AUC进一步提升到0.883。
3.6. 单个miRNA的临床诊断实用性
单个miRNA在特定表型中展现出不同的临床应用潜力。例如，在T2D-MAFLD中，miR-197具有较高的灵敏度（81%）和特异性（80%）。在OB-MAFLD中，miR-99a表现出极高的特异性（97.5%），可作为确认性标志物。在L-MAFLD中，miR-15a的高特异性（87.0%）和极高的阴性预测值（95.7%）使其在排除诊断中具有重要价值。
4. 讨论
本研究证实，不同MAFLD表型具有特征性的循环miRNA表达谱，这与它们在脂肪肝发病机制中的已知功能相符。miR-122、miR-103a、miR-222、miR-15a、miR-34a的上调以及miR-197、miR-99a的下调模式，分别关联于肝脏脂质合成、胰岛素抵抗、脂肪生成、细胞凋亡及炎症抑制等不同通路。将特征性miRNA与生化标志物整合，极大地增强了对MAFLD亚型，特别是临床诊断较为困难的L-MAFLD的鉴别能力。尽管存在研究设计为单中心、L-MAFLD样本量相对较小、缺乏肝脏病理学金标准验证等局限性，本研究结果仍为开发基于循环miRNA的无创、早期、表型特异性诊断工具提供了有力的证据和清晰的框架。未来的多中心验证和功能机制研究将推动这些发现向临床应用转化。
5. 结论
本研究表明，独特的循环miRNA特征谱可以实现MAFLD不同表型的特异性区分。miR-103a、miR-34a和miR-197是T2D-MAFLD的特征标志物，miR-122、miR-222和miR-99a定义了OB-MAFLD，而miR-15a则特异性指向L-MAFLD。将这些miRNA组合成面板，并与现有的生化标志物结合，可显著提高诊断准确性，为MAFLD的早期分层和个体化管理提供了极具前景的非侵入性策略，值得在更大的多中心队列中进行验证。
