《RNA Biology》：LINC00852 inhibits colorectal cancer progression by regulating cell apoptosis, epithelial?mesenchymal transition, invasion, and cuproptosis through miR-1276/LACTB
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本研究首次揭示长链非编码RNA LINC00852在结直肠癌（CRC）中作为肿瘤抑制因子发挥作用。它通过竞争性结合并抑制致癌miRNA miR-1276，上调下游肿瘤抑制基因LACTB的表达，进而调控细胞凋亡、上皮-间质转化（EMT）、侵袭迁移及铜死亡（cuproptosis）过程，为CRC的诊断与治疗提供了新的潜在靶点。
引言
结直肠癌（Colorectal Cancer, CRC）是全球范围内最常见、死亡率最高的恶性肿瘤之一，其发病机制涉及多基因、多阶段的复杂过程。非编码RNA，特别是长链非编码RNA（lncRNA）和微小RNA（miRNA）在肿瘤发生发展中扮演着关键调控角色。本研究聚焦于一个关键的lncRNA分子——LINC00852，旨在探究其在CRC中的表达、功能及其下游调控机制，特别是与miR-1276/LACTB轴以及与铜死亡（cuproptosis）这一新近发现的细胞死亡方式之间的关联。
LINC00852、miR-1276与LACTB在结直肠癌中的表达谱
研究首先通过生物信息学数据库分析了相关分子在CRC中的表达情况。来自ENCORI和TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库的数据显示，与正常组织相比，在结直肠癌组织中，致癌性miR-1276的表达显著上调，而肿瘤抑制基因LACTB的表达则显著下调，并且其下调程度与癌症分期和淋巴结转移呈正相关。值得注意的是，通过对可能结合miR-1276的lncRNA进行筛选，研究者发现LINC00852是候选分子之一。TCGA数据分析进一步证实，LINC00852在CRC中的表达同样显著下调，尽管它在不同癌症类型中的表达模式并不一致，提示其功能可能具有组织特异性。
LINC00852与miR-1276/LACTB轴的调控关系
为了验证LINC00852的功能，研究者在CRC细胞系中进行了过表达实验。结果显示，过表达LINC00852能显著抑制miR-1276的表达。进一步的荧光素酶报告基因实验证实，LINC00852的序列上存在与miR-1276的结合位点，两者可以直接相互作用。重要的是，LINC00852的过表达能够有效上调LACTB的mRNA和蛋白水平，而共转染miR-1276模拟物则可以削弱LINC00852对LACTB的上调作用。反之，抑制miR-1276可促进LACTB表达，而敲低LINC00852则会减弱这种促进作用。这些结果清晰地表明，LINC00852通过“海绵”吸附作用，结合并抑制miR-1276，从而解除miR-1276对下游靶基因LACTB的抑制，最终导致LACTB表达上调。这一调控轴LINC00852/miR-1276/LACTB构成了本研究的核心分子通路。
LINC00852通过miR-1276/LACTB抑制结直肠癌细胞的恶性表型
研究随后在细胞水平深入探讨了LINC00852/miR-1276/LACTB轴的生物学功能。一系列实验表明，过表达LINC00852能够显著抑制CRC细胞的多种恶性生物学行为：
- 1.
抑制上皮-间质转化与细胞活力：LINC00852过表达上调了上皮标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）的表达，下调了间质标志物N-钙粘蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达，表明其能抑制EMT过程。同时，它显著降低了CRC细胞的活力。而共转染miR-1276模拟物或LACTB的小干扰RNA（siRNA）均能逆转LINC00852的这些抑制效应。
- 2.
促进细胞凋亡：流式细胞术检测显示，LINC00852过表达能显著促进CRC细胞凋亡。机制上，LINC00852增强了凋亡关键执行蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9以及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）的活性。同样，miR-1276的过表达或LACTB的敲低可以阻断LINC00852诱导的凋亡。
- 3.
抑制细胞侵袭与迁移：Transwell实验和划痕愈合实验证实，LINC00852过表达能显著抑制CRC细胞的侵袭和迁移能力。同时，它降低了与侵袭转移密切相关的基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达与分泌。这些抑制效应同样可被miR-1276或LACTB siRNA所逆转。
LINC00852通过LACTB抑制体内肿瘤生长并与铜死亡相关
为了在更接近生理环境的条件下验证上述发现，研究者构建了裸鼠皮下移植瘤模型。实验结果显示，过表达LINC00852能显著抑制肿瘤的生长，表现为肿瘤体积和重量的减小，并伴随肿瘤组织中Caspase-3活性的升高。然而，当同时敲低LACTB表达时，LINC00852对肿瘤生长的抑制作用被明显削弱，这强有力地证明了LINC00852在体内的抑癌作用依赖于LACTB。
此外，研究有一个重要的延伸发现：LINC00852的过表达不仅下调了miR-1276、上调了LACTB，还显著增加了肿瘤组织中铜死亡（cuproptosis）关键调控蛋白FDX1的表达以及肿瘤内的铜离子水平。而敲低LACTB则会阻断FDX1表达和铜离子水平的上升。在体外细胞实验中，也观察到了类似现象，并且铜死亡抑制剂TTM能够阻断LINC00852对细胞活力的抑制及其诱导的Caspase-3活性升高。这些结果表明，LINC00852/LACTB轴的抗癌作用很可能与激活铜死亡这一细胞死亡途径有关。
讨论与结论
本研究发现，在结直肠癌中低表达的lncRNA LINC00852扮演着肿瘤抑制因子的角色。其分子机制在于，LINC00852作为竞争性内源RNA（ceRNA），像“海绵”一样吸附致癌miR-1276，解除其对下游靶基因LACTB的抑制，从而上调LACTB这一重要抑癌基因的表达。通过激活LINC00852/miR-1276/LACTB这条信号轴，能够有效抑制CRC细胞的EMT进程、增殖活力、侵袭迁移能力，并促进细胞凋亡。尤为重要的是，该研究首次将LINC00852/LACTB轴的抑癌效应与新兴的铜死亡途径联系起来，发现其能上调铜死亡关键蛋白FDX1并增加细胞内铜离子浓度，提示激活铜死亡可能是其发挥抑癌作用的另一条通路。总之，这项研究不仅系统阐明了LINC00852在CRC中通过ceRNA机制发挥抑癌作用的分子网络，还揭示了其与铜死亡的潜在关联，为理解CRC的发病机制提供了新的视角，并为开发以LINC00852/miR-1276/LACTB轴为靶点的诊断方法和治疗策略奠定了坚实的理论基础。
