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本研究评估了薄荷（MP）与山茱萸（CO）以6:4比例（MC）的复方提取物对认知障碍的神经保护作用。MC在体外显著抑制H2O2诱导的SK-N-SH细胞损伤与凋亡，并上调BDNF（脑源性神经营养因子）mRNA表达；在体内则有效改善东莨菪碱诱导大鼠的记忆损伤，其机制与恢复海马乙酰胆碱水平、上调BDNF蛋白表达及增强ERK（细胞外信号调节激酶）/AKT（蛋白激酶B）/CREB（cAMP反应元件结合蛋白）磷酸化有关，为轻度认知障碍（MCI）的多靶点植物疗法提供了临床前证据。
引言：关注轻度认知障碍的联合治疗策略
轻度认知障碍是介于正常衰老与痴呆之间的临床阶段，其特征是超出正常年龄相关的认知功能减退，年转化率为10-15%，已成为全球重要的健康问题。其病理机制复杂，涉及氧化应激、兴奋性毒性及胆碱能系统失调，并常伴有脑源性神经营养因子表达下降及其下游ERK/AKT/CREB信号通路的抑制。目前，针对单一机制的治疗策略效果有限。薄荷与山茱萸作为两种具有潜在神经保护活性的草药，前者以其抗氧化、抗凋亡和调节乙酰胆碱酯酶活性的作用被报道，后者则与增强BDNF信号、调节兴奋毒性及线粒体应激有关。本研究旨在系统评估这两种草药以6:4比例形成的复方提取物在体外和体内模型中的神经保护及认知增强作用，并探讨其潜在机制。
结果：复方提取物在体外模型中表现出优异的保护作用
首先，通过高效液相色谱-二极管阵列检测确认了复方提取物中标志性化合物迷迭香酸和山茱萸苷的存在，为其质量控制提供了基础。
在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞实验中，使用H2O2建立氧化应激损伤模型。研究发现，复方提取物预处理能显著提高H2O2暴露后的细胞活力，并上调BDNF mRNA表达水平。其中，以6:4比例的复方提取物效果最为显著，其保护作用优于单一草药提取物。进一步的流式细胞术分析显示，6:4复方提取物能够以浓度依赖性的方式显著减少H2O2诱导的细胞凋亡（包括早期和晚期凋亡）和坏死。
为了探究提取物中关键成分的作用，研究评估了迷迭香酸和山茱萸苷单独及组合（6:4）的效果。结果表明，两者单独使用均能减轻H2O2诱导的细胞毒性并上调BDNF mRNA，而6:4比例的联合使用在最高测试浓度下展现出比单一成分更强的保护作用，提示成分间可能存在协同效应。
结果：复方提取物有效改善大鼠的认知功能障碍并激活海马信号通路
在体内研究中，通过连续28天灌胃给予东莨菪碱诱导记忆障碍的Sprague-Dawley大鼠模型，评估了复方提取物的效果。行为学测试结果表明，与东莨菪碱模型组相比，各剂量（50、100、200 mg/kg/天）的复方提取物均能显著改善大鼠的认知功能。具体表现为：在被动回避测试中，大鼠的步入潜伏期显著延长；在莫里斯水迷宫测试中，大鼠的逃避潜伏期缩短，并且在探测试验中，大鼠在目标象限停留的时间显著增加，表明其空间记忆保留能力得到改善。同时，复方提取物处理还能恢复因东莨菪碱而降低的海马乙酰胆碱水平。
机制研究进一步发现，复方提取物能够逆转东莨菪碱引起的海马BDNF蛋白表达下降，并显著增强其下游信号分子ERK、AKT和CREB的磷酸化水平，且呈剂量依赖性。这为复方提取物改善认知功能提供了分子层面的解释。
讨论：多靶点协同作用与转化潜力
本研究结果表明，薄荷与山茱萸的6:4复方提取物通过多靶点机制发挥神经保护和认知增强作用。在体外，它通过抗氧化和抗凋亡作用保护神经元免受氧化损伤，并维持BDNF的表达。在体内，它不仅改善了行为学上的记忆缺陷，还从胆碱能和神经营养信号两方面进行了调控：恢复了海马乙酰胆碱水平，并激活了BDNF-ERK/AKT/CREB信号通路。这种同时针对氧化应激、胆碱能功能障碍和神经营养支持的多重作用机制，使其成为应对轻度认知障碍复杂病理生理学的有潜力的策略。标志性化合物迷迭香酸和山茱萸苷的活性进一步支持了提取物的功效。尽管本研究存在样本量有限、模型急性等局限性，但结果为该复方提取物作为管理年龄相关认知衰退和轻度认知障碍的候选治疗剂提供了有力的临床前证据，并为其进一步的标准化、剂量优化和临床前安全性研究奠定了基础。
材料与方法
研究使用了SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞系和7周龄雄性Sprague-Dawley大鼠。薄荷和山茱萸分别用30%和20%乙醇提取，并按6:4重量比混合成复方提取物。细胞实验通过H2O2诱导氧化损伤，检测细胞活力、BDNF mRNA表达和凋亡。动物实验中，大鼠灌胃给予复方提取物或阳性对照磷脂酰丝氨酸28天，并腹腔注射东莨菪碱诱导记忆障碍，通过被动回避测试和莫里斯水迷宫评估认知功能。最后，取海马组织进行乙酰胆碱水平测定和Western blotting分析BDNF及其下游信号蛋白的表达。所有数据均使用GraphPad Prism 9进行统计分析。
