全谱大麻油（CBD:THC 2:1）调节膳食诱导的雌性MASLD大鼠肝脏病变及内源性大麻素系统

《Frontiers in Nutrition》：Cannabis oil modulates liver alterations and endocannabinoid system changes in a female rat model of diet-induced MASLD

本文探讨了在雌性Wistar大鼠模型中，口服全谱大麻油（CBD:THC 2:1）对高糖饮食（SRD）诱导的代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）的改善作用。研究表明，该制剂可显著改善肝脏脂质代谢，降低非酒精性脂肪性肝病活动度评分（NAS）和纤维化标志物，减轻氧化应激，并通过上调NrF2、下调NF-κB p65表达，以及调控内源性大麻素系统（ECS）相关指标，展现了其在女性特异性代谢性肝病模型中的预防潜力。

　　

研究背景与目标

肝脏是维持体内稳态的关键器官，负责脂质、碳水化合物和蛋白质的代谢。当代谢失衡，特别是长期摄入高糖饮食时，肝脏脂质代谢会发生紊乱，导致脂质过度堆积，形成肝脏脂肪变性，即代谢功能障碍相关脂肪性肝病。MASLD的发生发展与内源性大麻素系统的失调密切相关，其中CB₁受体的过度激活会促进脂肪从头合成、抑制脂肪酸氧化、加剧氧化应激和纤维化进程。值得注意的是，大多数关于大麻素干预代谢疾病的研究集中在雄性动物模型，而性别差异在MASLD病理生理学和ECS功能中日益受到关注。雌性个体的激素环境可能显著影响肝脏代谢和对干预措施的反应。因此，本研究旨在利用雌性Wistar大鼠模型，探究一种特定比例的全谱大麻油对高糖饮食诱导的MASLD及相关肝脏病变的改善作用及其对ECS的调节机制。

材料与方法

研究使用了18只雌性Wistar大鼠，将其随机分为三组，进行为期3周的喂养实验：参考饮食（RD）组、高糖饮食（SRD）组以及高糖饮食加全谱大麻油（SRD + Ca）干预组。所用大麻油提取自特定品种的大麻花，经高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）分析确认其大麻素和萜烯成分，其中大麻二酚与Δ-9-四氢大麻酚的比例为2:1，并含有β-石竹烯、α-葎草烯等萜烯。干预组大鼠通过口服灌胃方式每日接受1 mg/kg体重大麻油。实验结束后，采集血液和肝脏组织，用于后续分析。

评估指标涵盖多个层面：

1. 1.
   肝脏组织学：通过苏木精-伊红（H&E）染色评估肝脏脂肪变性和计算非酒精性脂肪性肝病活动度评分。
2. 2.
   脂质代谢相关酶活性：检测脂肪从头合成关键酶——乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合酶（FAS）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）和苹果酸酶（ME）的活性；同时测定线粒体脂肪酸β-氧化限速酶——肉碱棕榈酰转移酶-1（CPT-1）、CPT-2及总CPT的活性。
3. 3.
   氧化应激与抗氧化系统：测定肝脏活性氧（ROS）水平、硫代巴比妥酸反应物（TBARS）含量以评估氧化损伤和脂质过氧化；通过免疫组化分析4-羟基壬烯醛（4-HNE）修饰蛋白的表达；检测非酶抗氧化剂谷胱甘肽（GSH）含量以及过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽还原酶（GR）的活性。
4. 4.
   关键转录因子表达：利用免疫组化技术分析肝脏中核因子E2相关因子2（NrF2）和核因子κB p65亚基（NF-κB p65）的蛋白表达水平。
5. 5.
   肝脏纤维化评估：采用天狼星红染色结合偏振光显微镜观察胶原沉积，并定量分析胶原阳性区域百分比；测定肝脏羟脯氨酸含量；通过免疫组化检测转化生长因子-β₁（TGF-β₁）的表达。
6. 6.
   内源性大麻素系统分析：测定血清中两种主要内源性大麻素——花生四烯酸乙醇胺（AEA）和2-花生四烯酸甘油（2-AG）的水平；通过蛋白质印迹法（Western Blot）检测肝脏CB₁受体的蛋白表达量。

研究结果

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  改善肝脏脂肪变性与脂质代谢失衡
  高糖饮食成功诱导了雌性大鼠的肝脏脂肪变性，SRD组的非酒精性脂肪性肝病活动度评分显著升高。大麻油干预有效降低了该评分。在分子机制上，SRD喂养显著提高了ACC、FAS、G-6-PDH和ME等脂肪合成酶的活性，同时降低了CPT-1和总CPT的活性，表明肝脏脂质代谢偏向合成、抑制分解。口服大麻油后，ACC和ME的活性恢复至接近RD组水平，CPT-1和总CPT的活性也得到显著提升，表明其能纠正脂质代谢的失衡。
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  减轻氧化应激与调控抗氧化防御
  SRD组大鼠肝脏的ROS水平和TBARS含量显著上升，表明氧化应激增强和脂质过氧化加剧。免疫组化显示，代表氧化损伤的4-HNE修饰蛋白表达也明显增加。与此同时，肝脏的抗氧化防御系统受损，表现为GSH含量下降，CAT、GPx和GR的活性降低。大麻油干预显著逆转了这些变化，降低了ROS、TBARS和4-HNE水平，提升了GSH含量以及GPx和GR的活性，部分恢复了CAT活性。
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  调节NrF2/NF-κB信号通路
  氧化应激与炎症通路密切相关。研究发现，SRD喂养导致肝脏中具有抗氧化保护作用的转录因子NrF2表达下降，而促炎转录因子NF-κB p65的表达则显著上升。大麻油处理上调了NrF2的表达，同时下调了NF-κB p65的表达，提示其可能通过调节这一关键信号轴来改善肝脏的氧化和炎症状态。
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  抑制早期纤维化进程
  组织学分析显示，SRD组大鼠肝脏出现早期纤维化改变，胶原纤维在血管壁和间质区域沉积增加，胶原阳性区域百分比和羟脯氨酸含量均显著升高。促纤维化因子TGF-β₁的表达也同步上调。大麻油干预有效减少了胶原沉积，降低了羟脯氨酸含量和TGF-β₁表达，表明其具有抗肝纤维化潜力。
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  调控内源性大麻素系统
  ECS在高糖饮食诱导的MASLD中呈现过度激活状态。SRD组大鼠血清中的AEA和2-AG水平显著升高，肝脏CB₁受体蛋白表达也明显增加。大麻油干预后，循环中的AEA和2-AG水平有所下降，肝脏CB₁受体的表达则被显著抑制，恢复至接近正常水平。

结论与意义

本研究首次在雌性Wistar大鼠模型中系统评估了全谱大麻油对高糖饮食诱导的MASLD的多重保护作用。该制剂通过多靶点、多通路协同作用，有效改善了肝脏脂肪变性，其机制涉及：纠正脂质代谢失衡（抑制脂肪合成、促进脂肪酸氧化）、增强抗氧化防御、减轻氧化损伤与炎症反应（调控NrF2/NF-κB轴）、抑制早期纤维化进程，并最终使过度激活的内源性大麻素系统趋向正常化。

这项研究的突出意义在于专注于雌性动物模型，为理解大麻素在女性特异性代谢背景下的作用提供了宝贵数据，弥补了临床前研究中的性别偏见。研究表明，CBD:THC比例为2:1的全谱大麻油作为一种潜在的营养制剂，在预防与肝脏脂肪变性、氧化应激和纤维化相关的代谢紊乱方面展现出前景。当然，由于使用的是全谱提取物，其效应是多种大麻素、萜烯等成分共同作用的“随行效应”结果。未来需要更深入的研究来剖析各成分的具体贡献、明确剂量效应关系，并评估其在更长期MASLD模型或治疗情境下的效果，以推动其向人类应用转化。