一种简单且灵敏的基于纤维素纸的微提取方法，用于从人体血清/血浆中提取25种类固醇酯，以用于兴奋剂检测目的

微提纯方法检测20μL血清/血浆中的25种甾体雌激素，采用未修饰纤维素卡和双甲醇提取结合Girard's P衍生化，液相色谱-MS/MS验证其灵敏度（LOD 0.05-0.70 ng/mL）、稳定性（72h）及准确性，三志愿者样本显示睾酮叔丁酯检测有效期为1个月。

　　

摘要

血液在兴奋剂检测领域越来越多地被用作生物基质；然而，可用于分析的血液体积有限，这构成了一个重大挑战，尤其是在需要对同一样本进行多次检测时。本研究提出了一种简单高效的微提取方法，该方法利用未经改性的纤维素从仅20 μL的血清或血浆中提取25种类固醇酯。样品制备过程包括将20 μL的血清或血浆滴加到纤维素卡片上，然后用500 μL的甲醇进行两次提取，随后使用Girard试剂P进行衍生化处理。分析采用液相色谱与串联质谱联用技术进行。该分析流程根据UNI CEI EN ISO/IEC 17025标准以及WADA的技术规则和要求进行了定性验证，验证内容包括选择性（目标分析物能够与基质干扰物区分开）、灵敏度（检测限在0.05–0.70 ng/mL范围内）、携带效应（在阳性样本注射后注射的阴性样本中未检测到任何信号）、日内和日间稳定性（保留时间变化≤0.5%）、基质效应（13–32%）、提取物稳定性（目标分析物在10°C下的自动采样器中至少稳定72小时）以及提取效率（43–88%）。最终对注射十一酸睾酮后的血浆样本进行了分析：在所有三名志愿者体内，该化合物在给药后至少一个月内仍可检测到，证明了这种新开发方法在兴奋剂检测中的有效性。

图形摘要