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本研究是首个对意大利南部伪潜蛾科（Scythrididae）进行的分子调查，通过DNA条形码（DNA barcoding）与形态学相结合的整合分类学（integrative taxonomy）方法，在卡拉布里亚和巴西利卡塔地区鉴定了10个物种，其中包括首次在意大利大陆记录的Scythris dissitella等多项动物地理学新发现。研究揭示了该地区该科被低估的多样性，并确认了COI-5P基因序列在微小型鳞翅目（microlepidoptera）物种界定中的有效性，为丰富全球生命条形码系统（Barcode of Life Data System, BOLD）数据库、推动该地区生物多样性认知做出了关键贡献。
1. 引言
伪潜蛾科（Scythrididae）是一类体型微小、外部形态同质性高的微小型鳞翅目（microlepidoptera），其物种的可靠鉴定主要依赖于生殖器结构的检查。在意大利，对该科的研究虽然比其他微小型鳞翅目科更为深入，但仍缺乏分子数据。全球范围内，该科已知约925个物种，在欧洲有201种，而在意大利已记录62种。尽管在西古北界等地区已有较多研究，但地中海地区，尤其是意大利南部，其物种多样性仍未得到充分评估。DNA条形码（DNA barcoding）技术作为一种高效、低成本物种界定和发现隐蔽多样性的工具，在鳞翅目研究中已被广泛接受，但对于意大利南部的微小型鳞翅目而言，分子参考库仍不完整。本研究旨在通过DNA条形码技术，结合形态学分析，填补意大利南部伪潜蛾科多样性认知的空白，丰富全球参考数据库，并改进该地区该类群的动物地理学知识。
2. 材料与方法
研究材料采集自意大利南部的卡拉布里亚和巴西利卡塔地区。尽管多数欧洲伪潜蛾科物种具有趋光性，但本研究中的标本主要通过白天在花或植被上采集获得，仅有少数通过紫外LED诱虫灯捕获。对每个标本提取一至多条腿的DNA，送至加拿大生物多样性基因组学中心（Centre for Biodiversity Genomics）进行基于PacBio Sequel平台的SMRT测序，目标区域为标准DNA条形码区——细胞色素c氧化酶亚基I（Cytochrome c oxidase subunit I, COI）基因的5‘端片段（COI-5P）。共分析了29个标本，并对其进行了生殖器解剖以进行形态学鉴定。生成的序列上传至生命条形码系统（Barcode of Life Data System, BOLD），并通过该系统的鉴定引擎与现有记录进行比较。每条序列被自动分配一个条形码索引号（Barcode Index Number, BIN），该算法框架将相似的条形码序列分组，通常对应于物种级别的实体。物种归属基于序列相似性百分比以及利用Kimura 2-参数模型构建的BOLD分类单元（Taxon ID）树进行分析。从BOLD获取了欧洲和地中海地区的所有公开序列，并使用MEGA11软件构建了邻接（Neighbor-Joining）树以进行可视化分析。
3. 结果
在分析的29个标本中，有28个成功获得条形码序列，序列长度为602–658 bp，共聚类为10个不同的条形码索引号（BIN），对应10个物种。其中三个BIN是BOLD系统中新创建的。生殖器解剖确认了研究中11个物种中的9个物种的形态学鉴定。研究发现，Scythris bolognella的标本被归入之前仅能鉴定到属级的BIN中，而测序失败的标本经解剖鉴定为S. fuscoaenea。此外，通过解剖还确认了属于新BIN的三个标本分别为S. adustella、S. dissitella和S. terrenella。研究还发现，部分BIN包含多个物种名称的标本，例如BIN BOLD:AER2798中同时含有S. tenuivittella和S. dissimilella的标本，BIN BOLD:AFS7299中则含有S. clavella和S. seliniella的标本，本研究通过解剖确认了其中的S. tenuivittella和S. clavella。
研究结果揭示了显著的动物地理学新发现。除S. aspromontis是在研究区域已被描述过的物种外，其余物种均为不同尺度的新记录：S. dissitella是意大利大陆的新记录，S. adustella和S. clavella是意大利南部的新记录，而S. inertella、S. tenuivittella、S. terrenella、S. pascuella和S. bolognella是卡拉布里亚地区的新记录。值得注意的是，本研究中的S. cf. tabidella标本与BOLD上已有的tabidella序列之间存在3.5%的显著遗传距离，且其第8腹板远端显示出两个明显的叶状突起，这与典型的S. tabidella不同，表明这些标本可能代表一个潜在的新物种，需要进一步的分类学研究。本研究中的所有物种均通过图片进行了展示。
4. 讨论
本研究是首个对意大利南部伪潜蛾科进行的分子调查，也是地中海地区为数不多的相关研究之一。独特条形码索引号（BIN）的出现，以及在某些情况下缺乏匹配序列的情况，表明意大利南部该科的实际多样性仍未得到充分研究。DNA条形码成功揭示了10个BIN，其中三个是新创建的，丰富了该科的全球参考库。特别值得关注的记录包括首次在意大利大陆记录的S. dissitella、可能是意大利首次记录的S. cf. tabidella、意大利南部首次记录且首次获得条形码序列的S. adustella，以及意大利南部首次记录的S. clavella。
在采集方法上，尽管许多物种已知具有趋光性，但本研究中S. aspromontis、S. adustella、S. dissitella、S. bolognella、S. inertella和S. pascuella均在白天通过检查植被采集到，而S. tenuivittella、S. fuscoaenea、S. clavella、S. terrenella和S. cf. tabidella则仅通过灯诱捕获。值得注意的是，没有任何一个物种同时在白天和夜晚被采集到，这突显了在24小时周期内进行采样对于全面获取物种组成的重要性。
本研究的成果显著增加了对意大利南部伪潜蛾科的了解。这个科因其含有大量特有物种，并且其成员能提供传粉等生态系统服务，在生物多样性保护中具有特殊重要性。整合了DNA条形码和形态学的分类学方法被证实是有效的，能够发现潜在的新分类单元并澄清物种的分布范围。未来需要更广泛的地理采样和更深入的综合分类学研究，以充分揭示地中海盆地伪潜蛾科的真实多样性。
