编辑推荐：
本篇研究首次深入报道了复方中药续命煮散（XMZS）在脑卒中治疗中的作用及其分子机制。研究表明，XMZS能够显著改善大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠的神经功能、减小脑梗死体积、减轻神经元损伤。其核心机制在于，XMZS能够有效抑制神经元铁死亡，并通过激活NRF2/GPX4/SLC7A11信号通路，降低脑内氧化应激和脂质过氧化水平，从而发挥神经保护作用。该研究为续命煮散的临床应用提供了重要的实验依据。
引言：卒中与中医药的机遇
脑卒中是由脑血管阻塞引发的全球性高致残、高死亡率疾病，其发病率在年轻人群中持续上升。目前，临床上仍缺乏改善卒中后神经功能恢复的高效方法和药物。中医药在治疗卒中方面因其有效性、安全性和可负担性而具有独特优势。本研究聚焦于由13味中药组成的复方续命煮散（XMZS），该方在中医传统中用于治疗卒中、脑出血和短暂性脑缺血发作，有助于患者肢体功能恢复。虽然XMZS已在中医领域获批用于治疗卒中，但仍需更多证据推动其广泛应用。
研究方法：体内外模型结合机制探索
本研究采用大脑中动脉闭塞（MCAO）手术构建大鼠卒中模型，并在体外通过氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）诱导原代海马神经元模拟卒中损伤。动物实验分为多个组别，包括假手术组、模型组、XMZS低中高剂量治疗组、阳性药丁苯酞（NBP）对照组，以及用于机制验证的XMZS联合NRF2抑制剂ML385组。通过灌胃给予大鼠不同剂量XMZS（15.75、31.5、63 g/kg/天）连续7天。在体外，采用XMZS含药血清（10%体积百分比）处理OGD/R诱导的神经元。
评估指标包括：
- •
神经功能：采用改良神经功能缺损评分（mNSS）和改良Bederson评分。
- •
脑梗死与神经元损伤：采用TTC染色评估脑梗死体积，H&E染色观察皮层、海马CA1和CA3区神经元形态。
- •
铁死亡相关指标：检测脑组织和神经元中Fe、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）含量，以及乳酸脱氢酶（LDH）活性。
- •
氧化应激与脂质过氧化：采用DHE、DCFH-DA、4-HNE免疫荧光染色检测活性氧（ROS）水平，C11-Bodipy染色评估脂质过氧化。
- •
线粒体结构与功能：透射电镜（TEM）观察线粒体超微结构，JC-1染色检测线粒体膜电位。
- •
信号通路：蛋白质印迹法检测NRF2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平。
研究结果：XMZS有效改善卒中损伤并抑制铁死亡
1. XMZS改善MCAO大鼠神经功能与病理损伤
高剂量XMZS（63 g/kg）治疗可显著降低MCAO大鼠的mNSS和Bederson评分，减小TTC染色显示的脑梗死体积，其效果与阳性药NBP相当。H&E染色显示，XMZS治疗，尤其是高剂量，能明显减轻MCAO大鼠皮层、海马CA1和CA3区的神经元损伤。
2. XMZS抑制卒中后脑组织铁死亡
MCAO大鼠脑组织中Fe和MDA含量显著升高，SOD和GSH含量降低，表明存在铁死亡。XMZS治疗（尤其是中、高剂量）可逆转这些变化，降低Fe和MDA，提升SOD和GSH水平。免疫荧光和DHE染色结果显示，XMZS增强了神经元核抗原（NeuN）表达，并降低了皮层和海马区的ROS水平，进一步证实了其抗铁死亡作用。
3. XMZS激活NRF2/GPX4/SLC7A11通路并减轻线粒体损伤
蛋白质印迹分析表明，MCAO大鼠脑组织中NRF2、GPX4和SLC7A11蛋白表达下调。XMZS治疗可剂量依赖性地上调这些蛋白的表达，激活NRF2/GPX4/SLC7A11通路。4-HNE/NeuN共染色显示，XMZS减少了神经元中脂质过氧化产物4-HNE的积聚。透射电镜结果揭示，高剂量XMZS能显著降低脑组织中线粒体的破裂百分比，增加线粒体长度，表明其能减轻铁死亡相关的线粒体损伤。
4. 体外实验验证XMZS通过同一通路发挥保护作用
在OGD/R诱导的原代海马神经元中，XMZS含药血清（10%体积百分比）能显著提高细胞活力，降低LDH活性和细胞凋亡率。同时，它降低了神经元内Fe、MDA和ROS水平，提高了SOD和GSH水平，并提升了线粒体膜电位，抑制了脂质过氧化。蛋白质印迹证实，XMZS含药血清能上调神经元中NRF2、GPX4和SLC7A11蛋白的表达。关键性发现是，当联合使用NRF2抑制剂ML385时，XMZS含药血清带来的所有这些有益效应均被逆转或消除。
5. 体内机制验证
在MCAO大鼠模型中，联合使用高剂量XMZS和ML385进行验证。结果显示，ML385完全逆转了XMZS单用对神经功能评分（mNSS和Bederson评分）的改善作用，也逆转了XMZS对脑组织内铁死亡指标（Fe、MDA、SOD、GSH）、神经元存活（NeuN）、氧化应激（ROS）以及线粒体结构（破裂百分比和长度）的保护作用。这直接证明了XMZS是通过激活NRF2/GPX4/SLC7A11通路来发挥其神经保护作用的。
讨论与结论
铁死亡是一种以铁依赖性脂质过氧化物累积为特征的细胞死亡方式，在卒中后脑损伤中扮演关键角色。本研究首次系统阐明了复方中药续命煮散治疗脑卒中的疗效及机制。结果表明，XMZS能通过激活NRF2/GPX4/SLC7A11信号通路，抑制神经元铁死亡，进而减轻氧化应激、脂质过氧化和线粒体损伤，最终改善神经功能并缩小脑梗死体积。
NRF2作为关键的转录因子，可调控抗氧化蛋白GPX4和胱氨酸转运蛋白SLC7A11的表达，是抵抗铁死亡的核心靶点。本研究中使用的抑制剂ML385能阻断NRF2的转录活性，从而抵消XMZS的保护作用，这为“XMZS通过激活NRF2通路起效”的机制提供了强有力的反向遗传学证据。
综上所述，本研究表明，传统中药复方续命煮散是一种极具潜力的卒中治疗策略。其通过激活NRF2/GPX4/SLC7A11通路，有效抑制卒中后神经元铁死亡，为XMZS的临床转化应用提供了扎实的理论和实验基础。未来的研究可进一步聚焦于其具体活性成分的鉴定与分离，以推动该方剂的现代化和精准医疗应用。
