《Cancers》：Co-Expression of IL-2 Enhances the Efficacy of FLT3-CAR-γδT Cells in Acute Myeloid Leukemia
Xiaona Wang,
Fengtao You,
Yulan Gu,
Xiaofei Ma,
Licui Jiang,
Hai Wu,
Gangli An,
Xiaopeng Tian and
Lin Yang
编辑推荐：
本研究发现，联合表达IL-2的FLT3-CAR-γδT细胞，展现出最强的抗急性髓系白血病(AML)活性与持久性。其通过提升细胞毒性、维持TSCM（干样记忆T细胞）亚群及高释放效应因子，在体内外均显著抑制肿瘤并延长生存期，为AML的“现货型(off-the-shelf)”免疫治疗提供了极具前景的新策略。
研究背景与挑战
急性髓系白血病(AML)是成人中最常见的急性白血病，伴随感染、贫血和出血等症状。虽然针对B细胞恶性肿瘤的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法已取得显著成功，但其在AML治疗中仍面临巨大挑战，如免疫抑制性肿瘤微环境、抗原逃逸以及CAR-T细胞质量问题等。因此，寻找更安全有效的治疗策略迫在眉睫。
γδT细胞是一种区别于传统αβT细胞的固有T细胞亚群，其具有不依赖于主要组织相容性复合体(MHC)的肿瘤识别能力，且诱发移植物抗宿主病(GvHD)的风险较低，被视为开发通用型(“现货型”)细胞疗法的理想候选者。本研究选择AML中高表达且预后相关的重要靶点——FLT3(CD135)作为靶标，旨在构建靶向FLT3的CAR-γδT细胞。为了进一步提升细胞的抗肿瘤活性和持久性，研究者创新性地在CAR结构中整合了细胞因子白细胞介素-2(IL-2)或白细胞介素-7(IL-7)的编码序列，从而构建了三种工程化细胞：FLT3-CAR-γδT细胞、FLT3-IL2-CAR-γδT细胞和FLT3-IL7-CAR-γδT细胞。
FLT3-IL2-CAR-γδT细胞展现出卓越的体外抗肿瘤活性
研究者成功制备了上述三种CAR-γδT细胞，并证实了CAR的稳定表达。通过细胞因子检测，确认了FLT3-IL2-CAR-γδT和FLT3-IL7-CAR-γδT细胞能够分别自分泌IL-2和IL-7。
在体外杀伤实验中，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞对多种AML细胞系(OCI-AML3、THP-1、MOLM-13和MV4-11)均表现出最强的细胞毒性。特别是在1:1的效靶比下，几乎能完全清除OCI-AML3、THP-1和MV4-11细胞。
此外，该细胞还能高水平释放关键的效应因子，如颗粒酶B、IFN-γ和TNF-α。在对7例原代AML患者细胞的杀伤实验中，虽然部分患者样本对CAR-γδT细胞不敏感，但FLT3-IL2-CAR-γδT细胞对4例敏感样本显示出较高的杀伤活性趋势，表明其具有临床治疗AML的潜力。
FLT3-IL2-CAR-γδT细胞具有显著的持续杀伤能力
为了模拟体内长期面对肿瘤抗原刺激的环境，研究设计了抗原重复刺激实验。结果发现，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞在多次刺激后，依然能维持较高的细胞活性和强大的杀伤效率，并且能持续稳定地释放高水平的效应细胞因子。SCM)亚群。F、G图显示FLT3-IL2-CAR-γδT细胞持续高表达LAG-3和TIM-3，这可能与其功能活性相关。">
值得注意的是，在多次抗原刺激后，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞能维持较高比例的干样记忆T细胞(TSCM)亚群。TSCM细胞具有强大的自我更新和增殖能力，能够迅速补充记忆和效应T细胞池，这可能是其维持持久杀伤能力的关键原因之一。此外，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞在刺激过程中持续高表达免疫检查点分子LAG-3和TIM-3。在γδT细胞中，这些分子的高表达可能并不等同于功能耗竭，反而可能与其强大的抗肿瘤效应功能相关。
FLT3-IL2-CAR-γδT细胞在体内表现出强大的抗肿瘤效果
在建立AML小鼠模型进行体内疗效评估后，活体成像和生存分析均证实，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞表现出最强的肿瘤抑制效果。与PBS组和普通γδT细胞组相比，所有CAR-γδT治疗组均能延长小鼠生存期，其中FLT3-IL2-CAR-γδT细胞组效果最显著，将小鼠的生存期延长至68天以上。同时，在输注CAR-γδT细胞19天后，仅在FLT3-IL2-CAR-γδT治疗组的小鼠外周血中仍能检测到γδT细胞，这表明IL-2的共表达有效支持了细胞在体内的长期存活和扩增。
总结与展望
本研究表明，在FLT3-CAR-γδT细胞中共同表达IL-2，是一种极具潜力的优化策略。FLT3-IL2-CAR-γδT细胞在体外和体内均展现出最优的抗AML活性、持久性和扩增能力。其机制可能归因于：1) 增强的细胞毒性；2) 持续的效应因子释放；3) 维持TSCM细胞亚群；4) 体内更强的持久性。
与目前仅对FLT3突变患者有效的FLT3抑制剂相比，FLT3靶向的CAR-γδT细胞对野生型和突变型AML细胞均有杀伤作用，具有更广的应用前景。同时，基于γδT细胞“通用型”和低GvHD风险的特性，FLT3-IL2-CAR-γδT细胞有望成为一种安全、有效且易于获取的“现货型”AML免疫治疗新选择。当然，在临床应用前，仍需对其安全性（特别是对正常造血干/祖细胞的潜在影响）进行审慎评估。这项研究为克服当前AML免疫治疗的诸多瓶颈提供了新的思路和实验依据。
