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本文通过一项横跨哈萨克斯坦全国的血清学调查，首次系统揭示了该国马属动物锥虫病（马媾疫与苏拉病）的血清反应性分布现状。研究利用补体结合试验（CFT）检测了超过6000份血清样本，结果显示整体血清阳性率为4.73%，但存在显著的地区差异。值得注意的是，CFT的血清学结果未能通过PCR检测到对应的布氏锥虫马媾疫亚种（T. equiperdum）DNA，提示当前血清阳性结果更可能反映的是对锥虫亚属（Trypanozoon）的暴露而非确诊的疾病。本研究为哈萨克斯坦建立综合监测体系提供了关键基线数据，并强调了开发更特异性诊断工具的必要性。
引言
动物锥虫病是由锥虫属（Trypanosoma）原虫引起的一组疾病，其中布氏锥虫马媾疫亚种（T. equiperdum）是马媾疫的病原体，因其慢性病程、显著的经济影响和诊断挑战而备受关注。在哈萨克斯坦，由于庞大的马群数量以及活跃的国内国际种畜流动，马属动物锥虫病具有特殊的相关性。该地区主要关注两种兽医病原体：T. equiperdum（导致马媾疫）和布氏锥虫伊氏亚种（T. evansi，苏拉病病原体，主要影响骆驼，但也可感染马属动物）。这两种感染的临床诊断极具挑战性。因此，血清学方法，特别是世界动物卫生组织（WOAH）推荐用于马媾疫诊断的补体结合试验（CFT）和免疫荧光抗体试验，被广泛应用于马属动物锥虫病的监测。然而，这些方法虽适用于大规模筛查，但无法可靠地区分活动性与既往感染，并可能因与其他锥虫物种的交叉反应而受到影响。虽然哈萨克斯坦历史上曾有马媾疫的报告，但目前缺乏全面、最新的全国性流行病学数据。本研究旨在利用补体结合试验，对哈萨克斯坦所有行政区进行全国性的马属动物锥虫病血清学调查。
材料与方法
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研究区域与动物
哈萨克斯坦是世界上最大的内陆国家，拥有多样化的生态区。研究于2023年至2025年间进行，从哈萨克斯坦17个行政区收集了血清样本。采样点根据马群密度和可达性进行选择。显示了采样点的地理位置分布。
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样品采集
通过颈静脉穿刺采集马匹的全血样本。血清样本在-20°C或液氮中保存，直至进行CFT/PCR检测。采样主要在常规兽医监测活动中进行，以确保能代表各地区畜群内的年龄、性别和管理条件，大多数动物在采样时未表现出明显的马媾疫临床症状。
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CFT方案
补体结合试验（CFT）按照WOAH《陆生动物手册》进行，使用哈萨克斯坦兽医科学研究所生产的商用诊断试剂盒。血清样本初始稀释度为1:5，溶血抑制（HI）≥50%判定为阳性。阳性血清进一步进行系列倍比稀释以确定终点滴度，诊断阳性的临界滴度值定为5。
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实时荧光定量PCR分子检测
对所有287份CFT血清阳性样本进行了PCR分析，使用针对T. equiperdum的plsX基因和T. evansi的VSG基因的商业化TaqMan探针法实时荧光定量PCR试剂盒。
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野外数据收集与制图方法
使用ArcGIS Pro 3.4进行空间数据分析和制图可视化。
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伦理声明
研究方案获得了哈萨克斯坦兽医科学研究所生物伦理委员会的批准。
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统计分析
使用描述性统计估计总体和地区血清阳性率。地区间和性别间的差异通过卡方检验进行评估，并使用Cramér's V系数和Phi系数量化关联强度。为解释地区聚类和不均衡的样本量，构建了以地区为随机截距的二项式广义线性混合效应模型。
结果
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样本概况
研究共从哈萨克斯坦17个行政区收集了6065份马属动物血清样本。基于截至2025年3月1日的数据，哈萨克斯坦的马匹数量从2021年的349万头增长到2025年的480万头，呈现稳定增长趋势。显示了被检马群的年龄和性别结构。显示了基于2025年统计数据的哈萨克斯坦马群数量分布。
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血清学检测结果
补体结合试验（CFT）共检出287份阳性样本，总体血清阳性率为4.73%。血清阳性动物在多个地区被检出，表明针对锥虫亚属（Trypanozoon）寄生虫的抗体反应具有广泛的地理分布。不同地区的血清阳性率差异显著，其中江布尔州（16.52%）、北哈萨克斯坦州（12.35%）和突厥斯坦州（11.21%）的阳性率最高。在曼格斯套、阿特劳、西哈萨克斯坦、阿克托别、阿拜和杰特苏州等地区未检出血清阳性动物。Pearson卡方检验证实了地区间血清阳性率的统计学显著差异。广义线性混合效应模型显示，超过一半的血清阳性率变异可归因于地区间的差异。显示了各地区血清阳性率的地理分布。
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抗体滴度与性别差异
阳性动物中的抗体滴度差异很大，最常见的滴度为1:10和1:80。性别间存在显著的血清阳性率差异，雄性马匹的血清阳性率（6.64%）高于雌性（3.81%），但Phi系数显示性别与抗体检测之间的关联非常弱。综合展示了各地区血清阳性率、抗体滴度分布及性别差异。
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分子检测结果
PCR分析在287份血清阳性样本中均未检测到T. equiperdum的pls基因，但有一份来自阿拉木图州的样本对T. evansi的VSG基因呈阳性。这些分子生物学发现表明，本研究中的CFT血清阳性并未伴随T. equiperdum感染的分子学确认。
讨论
马属动物锥虫病在兽医领域持续受到关注。在本研究中，通过CFT检测到4.73%的被检马匹血清阳性，且存在显著的地区异质性。一个核心发现是血清学结果与分子学结果之间的不一致。尽管有287匹马CFT检测呈阳性，但PCR分析未能确认T. equiperdum的存在，且仅有一份样本对T. evansi呈阳性。这种差异可能有多种解释：首先，马属动物锥虫病（尤其是马媾疫）的特点是慢性感染，寄生虫血症水平低或呈间歇性，寄生虫可能主要定位于组织而非外周血循环，从而降低了基于血液的分子检测的灵敏度。其次，抗体在暴露后可能持续较长时间，因此血清学阳性反映的是免疫记忆而非活动性寄生虫血症。第三，需考虑锥虫亚属内密切相关的物种间的交叉反应性。一份血清阳性样本中检测到T. evansi，支持了CFT反应性可能反映对锥虫亚属不同成员的暴露，而非物种特异性感染的可能性。第四，补体结合试验本身存在公认的诊断局限性。尽管WOAH推荐其用于马媾疫监测，但CFT无法提供物种水平的鉴别能力，并且可能因抗原成分和血清特性的不同而产生假阳性或非特异性反应。这些因素对基于WOAH标准的监测策略具有重要意义。血清学筛查对于大规模监测仍然至关重要；然而，物种归属和活动性马媾疫的确认需要分子学验证以及开发更具特异性的诊断工具。观察到的血清阳性率地区异质性可能反映了畜群管理实践、动物流动、种群密度和当地流行病学背景的差异。尽管本研究通过混合效应模型处理了地区层面的效应，但由于现有数据的结构，未能进行纳入性别等个体水平协变量的完全多变量分析。本研究存在若干局限性。首先，本地生产的CFT试剂盒虽遵循WOAH方法学原则并在国家监测计划中使用，但其性能特征（灵敏度、特异性、交叉反应性）尚未通过独立的国际验证研究正式确立。其次，分子检测仅限于选定的靶标，可能无法检测到所有流行毒株。再者，由于缺乏个体动物临床病史和系统性的分子确认数据，限制了将血清学结果与临床疾病关联的能力。总的来说，本研究首次提供了哈萨克斯坦全国范围内对马属动物锥虫血清反应性的概览。虽然结果表明抗体检测存在地理异质性，但物种水平的归属和活动性马媾疫的确诊需要进一步的分子学研究。加强血清学和分子学综合监测，使诊断标准与国际建议接轨，并开发更特异的检测方法，对于准确定义该地区马属动物锥虫病的流行病学状况至关重要。
结论
本研究首次在哈萨克斯坦全国范围内对马属动物锥虫病进行了血清学调查，覆盖了该国所有17个行政区。使用补体结合试验（CFT）检测出的总血清阳性率为4.73%，并存在显著的地区异质性。研究结果证明了马群中对锥虫亚属（Trypanozoon）寄生虫的血清反应性具有地理分布特征。然而，由于缺乏布氏锥虫马媾疫亚种（T. equiperdum）的分子学确认，这些结果应解释为暴露证据而非确诊的马媾疫感染。本研究为未来结合血清学和分子学方法的综合监测工作提供了基线数据。持续改进诊断工具并使其与国际标准接轨，对于准确定义哈萨克斯坦马属动物锥虫病的流行病学状况至关重要。
