B型流感病毒NS1相互作用宿主蛋白的筛选及其与hnRNPA0和DDX39B相互作用的表征

流感B病毒（IBV）NS1蛋白通过IMAC纯化结合拉下结合-质谱联用技术，揭示了hnRNPA0和DDX39B等宿主蛋白的相互作用，并解析了NS1蛋白结构域与宿主蛋白互作位点。GO、KEGG和PPI分析显示这些蛋白主要参与mRNA加工、病毒复制等过程，为抗病毒药物开发提供新靶点。

　　

摘要

乙型流感病毒（IBV）是一种流感病毒。NS1蛋白在病毒感染宿主细胞的过程中是一个强大的调控因子，在病毒复制、毒力和先天免疫中起着重要作用。蛋白质-蛋白质相互作用在整个病毒感染宿主细胞的生命周期中都起着极其重要的作用。识别与IBV NS1蛋白相互作用的宿主蛋白对于探索IBV的致病机制和筛选新的抗病毒药物具有重要意义。在本研究中，使用带镍的树脂通过固定化金属亲和层析（IMAC）纯化了NS1蛋白，并通过Pull-down结合质谱（LC–MS/MS）技术扩展了已知的IBV NS1蛋白的宿主相互作用组。对质谱结果中鉴定出的候选相互作用蛋白进行了基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析。这些鉴定出的候选相互作用蛋白主要参与蛋白质翻译、蛋白质折叠、mRNA加工、小分子代谢、核糖体生物发生以及病毒相关过程等生物学过程。进一步研究了异质核核糖核蛋白（hnRNPA0）和DEAD-box RNA解旋酶家族的DDX39B蛋白。共免疫沉淀（Co-IP）、免疫荧光分析（IFA）和BiFC实验均证实了IBV的NS1蛋白与hnRNPA0和DDX39B蛋白之间存在相互作用。我们还进一步研究了NS1蛋白的NS1-RBD结构域和NS1-ED结构域与hnRNPA0-GRD结构域之间的相互作用。这些数据为进一步研究NS1蛋白调控宿主细胞的机制提供了资源。

图形摘要

乙型流感病毒（IBV）是一种流感病毒。NS1蛋白在病毒感染宿主细胞的过程中是一个强大的调控因子，在病毒复制、毒力和先天免疫中起着重要作用。蛋白质-蛋白质相互作用在整个病毒感染宿主细胞的生命周期中都起着极其重要的作用。识别与IBV NS1蛋白相互作用的宿主蛋白对于探索IBV的致病机制和筛选新的抗病毒药物具有重要意义。在本研究中，使用带镍的树脂通过固定化金属亲和层析（IMAC）纯化了NS1蛋白，并通过Pull-down结合质谱（LC–MS/MS）技术扩展了已知的IBV NS1蛋白的宿主相互作用组。对质谱结果中鉴定出的候选相互作用蛋白进行了基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析。这些鉴定出的候选相互作用蛋白主要参与蛋白质翻译、蛋白质折叠、mRNA加工、小分子代谢、核糖体生物发生以及病毒相关过程等生物学过程。进一步研究了异质核核糖核蛋白（hnRNPA0）和DEAD-box RNA解旋酶家族的DDX39B蛋白。共免疫沉淀（Co-IP）、免疫荧光分析（IFA）和BiFC实验均证实了IBV的NS1蛋白与hnRNPA0和DDX39B蛋白之间存在相互作用。我们还进一步研究了NS1蛋白的NS1-RBD结构域和NS1-ED结构域与hnRNPA0-GRD结构域之间的相互作用。这些数据为进一步研究NS1蛋白调控宿主细胞的机制提供了资源。

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