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本研究针对马匹内部肿瘤诊断困难、缺乏可靠非侵入性生物标志物的临床难题，系统评估了血清胸苷激酶1（TK1）和血清淀粉样蛋白A（SAA）作为多种肿瘤（包括淋巴瘤、皮肤肿瘤等）生物标志物的诊断效用。研究发现，相较于对照组，大多数肿瘤患马的血清TK1活性显著升高，尤其在皮肤肿瘤中展现出优异的诊断准确性；而SAA则不具备肿瘤特异性。该研究为马匹肿瘤的无创诊断提供了新的潜在工具，有望减少对侵入性手术的需求，从而改善动物福利。
对于马兽医而言，诊断深藏于体腔内部的肿瘤常常是一项令人头疼的挑战。由于马匹体型庞大，常规的CT或MRI（核磁共振成像）扫描设备往往难以容纳它们，而X光和超声等影像学检查又常常无法给出确切的诊断结论。在这种情况下，为了明确诊断，兽医可能需要采取腹腔探查或组织活检等侵入性手术，这不仅给动物带来痛苦和风险，也常常因为解剖位置的复杂性、高昂的费用或动物福利的考量而难以实施。有时，诊断甚至只能在马匹死亡后的剖检中得以确认。因此，开发一种简便、快速且非侵入性的血液检测方法，用于辅助诊断马匹的肿瘤疾病，是兽医临床实践中一个迫切的需求。
近日，发表在《Veterinary Oncology》上的一项研究为此带来了新的希望。这项研究系统地评估了两种潜在的血液生物标志物——血清胸苷激酶1（Thymidine Kinase 1， TK1）和血清淀粉样蛋白A（Serum Amyloid A， SAA）——在马匹多种肿瘤诊断中的应用价值。胸苷激酶1（TK1）是一种与细胞增殖密切相关的酶，在肿瘤细胞中表达上调，其活性在人和犬的多种肿瘤（尤其是造血系统肿瘤）患者血液中均会升高。此前已有研究提示TK1可能是马淋巴瘤的潜在标志物，但在其他类型的马肿瘤中研究甚少。而血清淀粉样蛋白A（SAA）是马的主要急性期蛋白，常用于炎症的诊断，但其在肿瘤疾病中的作用尚未得到系统评估。研究人员希望通过这项研究，明确这两种标志物是否能有效区分患有肿瘤的马匹与健康的或患有其他非肿瘤性疾病的马匹。
为了回答这些问题，研究人员开展了一项横断面比较研究。他们从瑞士马医学研究所（Institut Suisse de Médecine Equine， ISME）的肿瘤生物样本库中获取了血清样本。研究队列包括91匹患有不同类型肿瘤的马和驴（包括淋巴瘤、[腺]癌、血管肉瘤、其他实体内部肿瘤、卵巢颗粒细胞瘤、肉瘤、鳞状细胞癌和黑色素瘤），以及149匹无肿瘤的对照马（包括42匹健康对照和107匹患有非肿瘤性疾病的对照）。研究人员使用氚标记的胸苷（3H]-dThd）的放射化学方法检测了所有240份血清样本的TK1活性，并使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测了其中112份样本的SAA浓度。随后，他们比较了肿瘤组与对照组的生物标志物水平，进行了受试者工作特征（ROC）曲线和截断值分析，并对已知患病率（淋巴瘤、肉瘤、黑色素瘤）的肿瘤计算了验后概率。
本研究采用了几个关键技术方法。首先，研究基于瑞士马医学研究所的肿瘤生物样本库，构建了一个包含多种肿瘤类型和对照组的队列。其次，使用基于氚标记胸苷的放射化学法精确测量血清TK1活性，该方法被认为是比商用化学发光免疫分析法更可靠的马特异性检测手段。最后，运用了全面的生物统计分析方法，包括使用Mann-Whitney U检验进行组间比较，使用ROC曲线评估诊断准确性，并基于已知的疾病患病率计算了验后概率，以评估TK1测试在真实临床情境下的应用价值。
研究结果
研究队列
研究共纳入了91匹患肿瘤的马科动物和149匹无肿瘤的对照马。肿瘤类型包括淋巴瘤（n=14）、[腺]癌（n=8）、血管肉瘤（n=4）、其他实体内部肿瘤（n=8）、卵巢颗粒细胞瘤（n=11）、肉瘤（n=14）、鳞状细胞癌（n=17）和黑色素瘤（n=15）。对照马分为无合并症的健康对照组和有非肿瘤性合并症的对照组。
肿瘤组与对照组TK1活性的比较
与伴有或不伴有非肿瘤性合并症的对照马相比，患有淋巴瘤、其他实体内部肿瘤、肉瘤、鳞状细胞癌和黑色素瘤的马其血清TK1活性均显著升高，且效应量（effect size）从中等到大。相比之下，患有[腺]癌、血管肉瘤或卵巢颗粒细胞瘤的马其TK1活性与对照组无显著差异。一个例外是，与有非肿瘤性合并症的对照组相比，患有血管肉瘤的马TK1活性有所升高，但效应量较小。
TK1活性在不同肿瘤组中的ROC曲线与截断值分析
ROC曲线分析显示，除[腺]癌外，血清TK1对所有肿瘤类型均表现出良好至优异的诊断准确性。具体而言，对于淋巴瘤、血管肉瘤、其他实体内部肿瘤、肉瘤、鳞状细胞癌和黑色素瘤，曲线下面积（AUC）均达到了优秀（0.90–1.00）或良好（0.70–0.79）的水平。当根据最大约登指数（Youden's index）确定最佳截断值时，肉瘤组（与两个对照组相比）以及鳞状细胞癌和黑色素瘤组（与有合并症的对照组相比）的TK1水平实现了阳性似然比（LR+）大于10且阴性似然比（LR-）小于0.1，表明其具有良好的诊断性能。
基于TK1活性诊断马淋巴瘤、肉瘤和黑色素瘤的验后概率
对于患病率极低的马淋巴瘤，阳性的TK1检测结果仅能小幅提高患病概率，阴性结果也仅能小幅降低患病概率。相反，对于患病率为中等到高的肉瘤和黑色素瘤（尤其在灰色马中），阳性的TK1结果能大幅提高患病概率，而阴性结果则能将患病概率降至接近零。这表明，在患病率较高的群体中，TK1测试具有更强的诊断价值。
肿瘤患马与有合并症对照组SAA浓度的比较
在所有八种不同的肿瘤组与有非肿瘤性合并症的对照组之间，SAA浓度均未发现显著差异。这表明SAA在本研究中不能作为可靠的肿瘤生物标志物来区分肿瘤和非肿瘤性疾病。
TK1活性与年龄及SAA浓度的相关性
相关性分析显示，在合并的对照组马匹中，TK1活性与年龄呈微弱但显著的负相关（ρ = ?0.26），即年轻马匹的TK1活性倾向于更高。然而，在所有合并样本或所有合并的肿瘤样本中，TK1活性与SAA浓度均未显示出显著的相关性。
研究结论与讨论
本研究证明，胸苷激酶1（TK1）在马科动物中的诊断效用可能不仅限于造血系统恶性肿瘤。研究验证了TK1是辅助确诊马淋巴瘤的一个有前景的生物标志物，并且在诊断肉瘤、鳞状细胞癌和黑色素瘤方面显示出甚至更强的区分潜力。尽管这些皮肤肿瘤通常可通过临床检查和活检确诊，但TK1测量提供了一种非侵入性的替代方案，尤其适用于活检不可行或存在禁忌的情况。然而，需要强调的是，TK1并非肿瘤特异性标志物，因此其诊断结果必须结合临床表现和其他诊断方法（如组织病理学和影像学）进行综合解读。
相比之下，尽管血清淀粉样蛋白A（SAA）在马医学中广泛用于监测全身性炎症，但本研究结果表明，它缺乏区分马匹肿瘤与非肿瘤性疾病的能力。
研究还指出，在评估TK1作为诊断工具的价值时，必须审慎考虑疾病患病率的影响。ROC曲线下面积（AUC）虽然被认为是评估诊断性能的稳健指标，但在患病率极低的情况下（如淋巴瘤），可能高估其诊断准确性。对于淋巴瘤这种低患病率疾病，TK1作为群体筛查工具的作用有限；但对于出现体重减轻、持续发热等提示肿瘤疾病的临床症状的特定病例，它仍具有重要的辅助诊断价值。
值得注意的是，本研究观察到患有全身性（多中心型）淋巴瘤（本研究中的主要亚型）的马匹，其血清TK1浓度似乎高于患有孤立性或皮肤淋巴瘤的马匹。一匹伴有广泛转移的多中心淋巴瘤患马显示了异常高的TK1活性（17.72 pmol/min/mL），这提示广泛的肿瘤受累与TK1活性显著升高相关，可能反映了疾病的进展程度。在犬淋巴瘤中，连续监测血清TK1活性已被推荐用于了解疾病进展和生存结局。对于部分可行治疗的马淋巴瘤病例（如皮肤或某些孤立性淋巴瘤），连续评估TK1浓度可能同样具有价值。
本研究的局限性在于，部分肿瘤组（如[腺]癌、血管肉瘤）样本量较小，且“其他实体肿瘤”组的构成高度异质，这限制了对这些肿瘤类型得出明确结论的能力。对于淋巴瘤组，TK1的相关发现被认为是可靠的，因为达到了计算所需的最小样本量。对于SAA的评估，所有组的样本量均构成限制。尽管如此，这项研究为TK1和SAA作为马匹潜在肿瘤标志物的未来研究提供了宝贵的初步见解和基础。
综上所述，血清TK1是马多种肿瘤类型（特别是淋巴瘤、肉瘤、鳞状细胞癌和黑色素瘤）的一个有前景的肿瘤标志物。未来的多中心研究将有助于收集更大规模的特定肿瘤亚群样本，并应探索连续TK1测量对不同肿瘤类型的预后价值。同时，研究结果也强调了SAA在马肿瘤中缺乏特异性，这与其作为一般急性期蛋白的作用一致。最终，开发马特异性的血清TK1检测试剂盒或即时检测工具，将极大增强其作为马医学中有价值的辅助生物标志物的实用性，推动马匹肿瘤无创诊断的进步。
