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多层级肌细胞分化中胎儿牛血清（FBS）浓度的优化及迁移机制研究。采用C2C12细胞系，通过替换培养基及检测Western blot、免疫荧光、收缩能力等指标，发现5%-20% FBS浓度范围可有效诱导多核肌管形成，其中15% FBS组分化程度最高。迁移速度实验表明，FBS浓度与细胞迁移速率呈正相关（p<0.05），推测细胞迁移能力增强可能促进肌细胞定向分化。
Eiji Nagamori|Hiroki Nagatani|Koichi Sugita|Masanobu Horie|Hideaki Fujita
大阪工业大学生物医学工程系，日本大阪市旭区大宫5-16-1，邮编535-8585
骨骼肌组织工程在药物筛选和再生医学领域受到了广泛关注。在现有的骨骼肌组织工程方法中，细胞片层的堆叠技术尤其具有前景，因为它能够制造出具有明确尺寸和形状的组织。通常通过降低血清浓度来诱导肌母细胞分化为多核肌管。然而，多层骨骼肌母细胞的最佳培养条件尚未得到充分研究。在本研究中，我们探讨了诱导多层肌母细胞分化的最佳胎牛血清（FBS）浓度。通过Western blotting、免疫荧光、收缩能力评估以及多层肌肉结构分析来评估分化情况。结果发现，较高的血清浓度比低浓度更有利于促进多层肌母细胞的分化。为进一步探究这一现象的机制，我们测量了不同FBS浓度下的细胞迁移速度，发现细胞迁移速度随FBS浓度的增加而加快，这可能有助于细胞分化。
研究节选
细胞培养
小鼠肌母细胞系C2C12来源于理研细胞库（日本和歌山）。细胞在含有10% FBS（Sigma–Aldrich，美国密苏里州圣路易斯）和1% 青霉素-链霉素（Fujifilm Wako Pure Chemicals）的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM，低糖型）中培养，培养条件为37°C和5% CO2，并在细胞达到汇合状态前进行传代。分化实验中，培养基被替换为DMEM。
含FBS培养基中的C2C12细胞多层分化
诱导肌母细胞分化的常用方法是降低血清浓度，并将胎牛血清替换为普通血清（如马血清或小牛血清），这种方法同样适用于C2C12细胞。然而有研究表明，即使在高FBS浓度下，当细胞达到汇合状态时，C2C12细胞仍能开始分化（26）。在本研究中，我们使用FBS简化了培养流程。首先通过Western blotting方法确定了C2C12细胞多层分化的最佳FBS浓度。
作者贡献声明
Eiji Nagamori：研究工作。Hiroki Nagatani：研究工作。Koichi Sugita：研究工作。Masanobu Horie：研究工作。Hideaki Fujita：撰写、审稿与编辑、初稿撰写、概念构思。
致谢
本项工作部分得到了MEXT/JSPS KAKENHI（项目编号：JP18K04856）的支持。作者声明不存在利益冲突。
