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PlexA蛋白通过完整胞内区介导轴突排斥引导，但其信号传导机制尚不明确。本研究发现Drosophila中SFK家族激酶Src64B通过磷酸化作用负调控PlexA的信号活性，且多个酪氨酸残基对PlexA的正常导向功能至关重要。
摘要
背景
研究表明，PlexA的排斥性导向功能依赖于其完整的细胞内区域，而非其RasGAP活性。目前对于激活的PlexA受体如何传递导向信号以引导生长锥的分子机制知之甚少。
目的
研究Src家族激酶（SFKs）是否对果蝇（Drosophila）的运动轴突路径寻找过程必不可少，以及SFKs在PlexA介导的轴突导向调节中的作用。
方法
将16期后期的胚胎固定、渗透处理，并用抗Fasciclin II（1D4）抗体进行免疫染色，以观察运动神经元的轴突投射模式。通过对S2细胞进行转染、免疫沉淀和免疫印迹分析来量化PlexA蛋白的磷酸化水平。我们构建了一系列包含特定酪氨酸到苯丙氨酸替换的PlexA突变体，并生成了这些突变体的转基因果蝇。利用这些PlexA突变体转基因，进行了SFKs与PlexA衍生物之间的遗传互补和遗传相互作用实验（采用功能增强模式）。
结果
遗传分析表明，SFK Src64B在特定选择点对ISNb轴突的选择性解聚和目标识别过程中是必需的。在培养细胞中，Src64B通过酪氨酸磷酸化作用降低PlexA的蛋白质稳定性。此外，使用9个包含细胞内区域单个或双重酪氨酸残基替换为苯丙氨酸的PlexA突变体转基因进行的遗传互补实验表明，多个酪氨酸残基对于正常的PlexA导向功能是必需的。最后，我们发现野生型PlexA的共表达可以抑制Src64B过表达引起的ISNb运动轴突缺陷，而所有酪氨酸到苯丙氨酸突变体PlexA的共表达则不仅没有抑制这些缺陷，反而加剧了这些缺陷。
结论
综合以上结果，我们认为Src64B介导的PlexA磷酸化作用会负调节PlexA的信号传导活性。
背景
研究表明，PlexA的排斥性导向功能依赖于其完整的细胞内区域，而非其RasGAP活性。目前对于激活的PlexA受体如何传递导向信号以引导生长锥的分子机制知之甚少。
目的
研究Src家族激酶（SFKs）是否对果蝇（Drosophila）的运动轴突路径寻找过程必不可少，以及SFKs在PlexA介导的轴突导向调节中的作用。
方法
将16期后期的胚胎固定、渗透处理，并用抗Fasciclin II（1D4）抗体进行免疫染色，以观察运动神经元的轴突投射模式。通过对S2细胞进行转染、免疫沉淀和免疫印迹分析来量化PlexA蛋白的磷酸化水平。我们构建了一系列包含特定酪氨酸到苯丙氨酸替换的PlexA突变体，并生成了这些突变体的转基因果蝇。利用这些PlexA突变体转基因，进行了SFKs与PlexA衍生物之间的遗传互补和遗传相互作用实验（采用功能增强模式）。
结果
遗传分析表明，SFK Src64B在特定选择点对ISNb轴突的选择性解聚和目标识别过程中是必需的。在培养细胞中，Src64B通过酪氨酸磷酸化作用降低PlexA的蛋白质稳定性。此外，使用9个包含细胞内区域单个或双重酪氨酸残基替换为苯丙氨酸的PlexA突变体转基因进行的遗传互补实验表明，多个酪氨酸残基对于正常的PlexA导向功能是必需的。最后，我们发现野生型PlexA的共表达可以抑制Src64B过表达引起的ISNb运动轴突缺陷，而所有酪氨酸到苯丙氨酸突变体PlexA的共表达不仅没有抑制这些缺陷，反而加剧了这些缺陷。
结论
综合以上结果，我们认为Src64B介导的PlexA磷酸化作用会负调节PlexA的信号传导活性。
