MiR-10a-5p通过抑制E2f7介导的自噬作用，加重糖尿病肾病中的足细胞损伤

糖尿病肾病足细胞损伤与自噬调控机制研究。通过高糖刺激体外足细胞模型及STZ诱导糖尿病小鼠，发现miR-10a-5p显著上调，靶向抑制该miRNA可减轻足细胞损伤、抑制凋亡及炎症反应并恢复自噬。机制研究表明miR-10a-5p通过直接调控E2f7转录因子实现上述效应，体内实验验证了靶向miR-10a-5p对肾损伤的修复作用。

　　

摘要

研究目的

足细胞损伤是糖尿病肾病（DN）的标志性特征，且显著促进了疾病的进展。越来越多的证据表明，在高血糖条件下，自噬功能障碍会加剧足细胞的功能障碍。然而，其背后的调控机制尚未完全明了。本研究旨在探讨microRNA-10a-5p（miR-10a-5p）在调节糖尿病肾病中足细胞损伤和自噬中的作用及机制。

方法

本研究在葡萄糖（HG）诱导的小鼠足细胞（MPC5）细胞以及链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠中探讨了miR-10a-5p的功能。通过使用miR-10a-5p的模拟物或抑制剂进行了功能获得和功能丧失实验。通过生物信息学分析，预测E2F转录因子7（E2f7）是miR-10a-5p的下游靶点，并通过双荧光素酶报告基因检测（dual-luciferase reporter assay）和RNA免疫沉淀（RIP）实验验证了miR-10a-5p与E2f7之间的结合。利用流式细胞术、Western blotting、酶联免疫吸附测定（ELISA）、透射电子显微镜（TEM）以及绿色荧光蛋白-单体红色荧光蛋白-LC3（GFP-mRFP-LC3）染色方法评估了足细胞损伤、细胞凋亡、炎症和自噬情况。通过沉默或过表达E2f7来验证其在miR-10a-5p介导的效应中的作用。

结果

在葡萄糖刺激的足细胞和糖尿病小鼠的肾组织中，miR-10a-5p的表达显著上调。抑制miR-10a-5p可减轻葡萄糖诱导的足细胞损伤，表现为细胞存活率提高、凋亡减少、炎症细胞因子分泌降低以及自噬活性恢复。E2f7被确定为miR-10a-5p的直接靶点。值得注意的是，沉默E2f7会消除miR-10a-5p对足细胞存活和自噬的保护作用，而过表达E2f7则会恢复miR-10a-5p过表达对足细胞的不良影响。在体内实验中，给STZ诱导的糖尿病小鼠注射AntagomiR-10a-5p可改善肾损伤并恢复自噬活性，同时增加小鼠肾组织中的E2f7表达。

结论

本研究表明，miR-10a-5p/E2f7轴是糖尿病肾病中足细胞损伤和自噬的关键调控因子。抑制miR-10a-5p可能是一种保护足细胞功能、减轻糖尿病肾病损伤的有效策略。

利益冲突声明

作者声明不存在任何利益冲突。

数据可用性声明

本研究中生成和/或分析的数据集已包含在论文中，经合理请求可向通讯作者获取。