摘要A013：填补透明细胞肾细胞癌骨转移小鼠模型与免疫治疗测试之间的空白 免费

《Cancer Research》：Abstract A013: Bridging the mouse modeling gap in clear cell renal cell carcinoma bone metastasis for immunotherapy testing Free

透明细胞肾细胞癌（ccRCC）骨转移模型构建及免疫治疗研究：通过CRISPR-Cas9敲除VHL基因的RENCA细胞在小鼠胫骨内注射成功建立骨转移模型，结合生物发光成像和COMET多组学平台分析，证实PD-1/CTLA-4抑制剂联合治疗显著调控CD8+ T细胞和Ki67+肿瘤细胞比例，为骨转移免疫治疗机制研究提供新工具。

　　

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摘要

透明细胞肾细胞癌（ccRCC）约占肾恶性肿瘤的80%。在约40%的转移患者中会出现骨转移，这是一种严重的并发症，显著增加了患者的发病率和死亡率，并给医疗系统带来了沉重的负担。ccRCC病灶中存在丰富的免疫浸润；因此，治疗转移性ccRCC的方法逐渐转向使用免疫检查点抑制剂（ICI），单独使用或与小分子抗血管生成酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）联合使用。然而，这种方法在骨转移（BM）患者中仍存在较大的治疗失败率；由于对骨组织的复杂分析探索有限，以及缺乏合适的临床前模型，导致这种失败的根本原因尚未明确。在这项研究中，我们基于RENCA肿瘤细胞开发并建立了一个具有免疫功能的骨转移模型。为了再现患者中ccRCC进展的关键特征，我们使用CRISPR-Cas9技术对VHL⁺ RENCA细胞进行了基因改造，敲除了vhl基因。通过在BALB/c小鼠的胫骨内注射来生成骨肿瘤，这是一种确保测试药物一致性和可重复性的成熟方法。VHL^- RENCA细胞表达荧光素酶，使得我们能够在注射后第5天通过生物发光成像技术进行纵向检测，随后肿瘤呈指数级生长。在注射后第7天、14天和21天通过免疫荧光分析进一步确认了肿瘤生长情况，结果显示肿瘤逐渐侵袭骨腔，形成了复杂的血管网络（这与vhl基因缺失的情况相符），并且有大量的免疫浸润细胞（包括CD8⁺ T细胞）被招募。随后，这些小鼠接受了不同剂量和方案的ICI治疗（包括抗PD-1和抗CTLA-4），结果在100%的病例中出现了从完全清除到肿瘤进展的各种反应。为了评估治疗对免疫浸润的影响，我们使用COMET多重平台分析了组织微阵列。通过结合20种不同的标记物，量化了八种不同的髓系和淋巴系细胞群体，包括它们的比例和空间分布。分析表明，抗PD-1和抗CTLA-4的联合使用显著增加了CD8⁺细胞的数量，同时减少了Ki67⁺肿瘤细胞的数量。综上所述，这些发现验证了我们模型的免疫治疗响应性，并突显了其在解析耐药机制和评估新型治疗组合方面的实用性。