米仔兰抗PC12细胞OGD/R损伤的靶点与作用机制研究

　　

摘要: 本研究在课题组前期发现中药米仔兰(Aglaia odorata Lour.)具有抗缺血性脑卒中药效的基础上,采用大鼠嗜铬细胞瘤(rat adrenal pheochromocytoma, PC12)细胞氧糖剥夺/再复(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)模型,利用细胞培养条件下稳定同位素标记(stable isotope labeling by amino acids in cell culture, SILAC)结合热蛋白质组学(thermal proteome profiling, TPP)技术鉴定米仔兰提取物的直接作用靶点群,并探究靶点相关信号通路,探讨米仔兰神经保护作用的分子机制。研究发现,米仔兰对OGD/R诱导的神经细胞损伤具有保护作用,可显著提高PC12细胞存活率、降低乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;靶点鉴定发现28个蛋白可能是米仔兰潜在的作用靶点,靶点功能主要与碳代谢等能量代谢信号通路相关。对靶点群的生物功能验证结果表明,米仔兰可增加OGD/R诱导的PC12细胞腺苷三磷酸(adenosine triphosphate, ATP)含量、提高线粒体呼吸链复合物活性、升高线粒体膜电位、减少线粒体超氧化物生成,并上调AMP活化的蛋白质激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)磷酸化水平及沉默调节蛋白1(sirtuin 1, SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha, PGC-1α)的表达。综上所述,米仔兰能够改善OGD/R诱导的神经细胞损伤,具有显著的神经保护活性,其作用机制可能与调控AMPK/SIRT1/PGC-1α通路、改善线粒体功能和能量代谢有关。