摘要 A021：研究 HIF-2α 抑制剂 belzutifan 对肾细胞癌（RCC）中 T 细胞细胞毒性的影响 免费

《Cancer Research》：Abstract A021: Investigation of the impact of the HIF-2α inhibitor belzutifan on T-cell cytotoxicity in renal cell carcinoma (RCC) Free

本研究通过建立体外肾细胞癌抗原模型，评估HIF-2α抑制剂贝鲁替尼对T细胞细胞毒性的影响。结果显示贝鲁替尼预处理增强T细胞特异性裂解活性，支持其在免疫检查点抑制剂联合治疗中的可行性。

　　

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摘要

引言：

肾细胞癌（RCC）的特征是肿瘤微环境缺氧，这种环境会招募免疫抑制性巨噬细胞和调节性T细胞来抑制抗肿瘤免疫。Belzutifan是一种缺氧诱导因子2α（HIF-2α）抑制剂，目前是晚期RCC的标准治疗方法。一些临床前小鼠实验数据表明，缺氧信号传导对效应T细胞的功能至关重要（Doedens等人，《自然免疫学》2013年；Veli?a等人，《癌症免疫学研究》2021年），这引发了人们对于药物抑制HIF-2α可能会损害抗肿瘤免疫的担忧。Belzutifan对人类T细胞功能，尤其是细胞毒性活性的影响尚不清楚。因此，我们建立了一个体外RCC抗原模型系统来评估Belzutifan对T细胞细胞毒性的影响。

方法：

使用来自人类VHL突变RCC细胞系786-O（亲本HLA-A*03:01）的细胞作为靶细胞。通过CRISPR–Cas9系统敲除了内源性HLA I类分子，并用慢病毒载体将HLA-A*02:01、CTAG1B（NY-ESO-1）和HIF-2α（野生型或对Belzutifan具有抗性的G323E突变体）导入细胞中，从而得到了786-O-WT和786-O-G323E两个细胞系。G323E突变会干扰Belzutifan与HIF-2α的结合，因此观察到的任何差异都可以归因于Belzutifan对T细胞的影响，而不是Belzutifan对786-O-G323E RCC细胞的直接细胞毒性作用。人类T细胞从健康供体的外周血单核细胞（PBMCs）中分离出来，并经过改造以表达HLA-A*02:01限制性的NY-ESO-1 T细胞受体（抗原特异性T细胞）。这些抗原特异性T细胞在1%氧浓度（缺氧条件下）预处理48小时后，与RCC细胞以效应细胞与靶细胞的比例（E:T）为0:1或1:1共培养12小时。通过流式细胞术结合Annexin V和碘化丙啶染色来量化细胞毒性活性，并对双色排除、CellTrace阳性的靶细胞进行 gating分析。特异性裂解率（%）的计算公式为：(1 ? [E:T = 1:1时的存活率] / [E:T = 0:1时的存活率]) × 100。统计显著性通过双侧配对t检验来确定。

结果：

在没有T细胞的情况下，用Belzutifan处理786-O-G323E和786-O-WT细胞12小时并未降低肿瘤细胞的存活率。经过Belzutifan预处理的T细胞对786-O-G323E和786-O-WT细胞的特异性裂解率显著高于DMSO处理的对照组（分别为p = 0.0385和p = 0.0256）。这些结果表明Belzutifan可能增强T细胞的细胞毒性。

结论：

本研究表明，在我们的缺氧模型抗原系统中，Belzutifan暴露并不会本质上损害抗原特异性T细胞对RCC靶细胞的细胞毒性。这一发现支持了将Belzutifan与免疫检查点抑制剂（ICIs）联合用于RCC治疗的生物学可行性。