开发并验证了一种用于检测胰岛素甘精抗药抗体的桥式酶联免疫吸附测定（Bridge ELISA）方法

抗甘精胰岛素抗体桥接ELISA方法开发及验证，旨在建立高效、低成本的血清检测技术，通过双甘精胰岛素涂层与标记的血清样本结合，结合HRP显色系统实现抗体检测，验证显示其检测灵敏度达78 ng/mL，特异性强，适用于临床免疫原性监测。

摘要

目的

甘精胰岛素是一种广泛用于治疗糖尿病的长效胰岛素类似物；然而，针对甘精胰岛素的抗药物抗体（ADAs）的产生可能会影响治疗效果并改变药理反应。因此，敏感且可靠地检测抗甘精抗体对于有效的免疫原性监测至关重要。本研究旨在开发并验证一种稳健、灵敏且成本效益高的桥接ELISA方法，用于检测人血清中的抗甘精抗体。

方法

本研究使用甘精胰岛素作为捕获试剂和检测试剂来开发桥接ELISA方法。微孔板预先涂覆了2.5 μg/mL的甘精胰岛素，然后与生物素标记的甘精胰岛素以1:1的比例混合的血清样本进行孵育。检测使用链霉亲和素–HRP结合物（稀释度为1:40,000）和TMB底物进行，吸光度在450 nm处测量。该方法根据免疫原性检测的验证原则，对其灵敏度、特异性、信噪比和动态范围进行了验证。

结果

经过验证的检测方法表现出高灵敏度和特异性，能够在78 ng/mL至5000 ng/mL的相对浓度范围内可靠地检测抗甘精抗体（准定量范围），最小所需稀释度（MRD）为1:3。该方法具有较高的信噪比，能够清晰区分阳性样本和阴性样本。检测结果证实了该方法适用于准确且可重复地检测人血清中的抗甘精抗体。

结论

所开发并验证的桥接ELISA方法提供了一种灵敏、特异且可重复的方法，用于监测抗甘精抗体。该检测方法为临床和研究环境中的免疫原性评估提供了实用工具，有助于改进甘精胰岛素治疗的治疗监测和管理。