《Frontiers in Immunology》：A large-scale profiling study of immune–coagulation associations in rheumatoid arthritis
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本文通过大规模回顾性队列（n=1656）系统性地描绘和内部验证了类风湿关节炎（RA）患者中循环免疫标志物（如IgG、ACPA、补体C3/C4）与常规凝血参数（如INR、PT、D-二聚体、纤维蛋白原）之间的可重复关联图谱，揭示了实验室水平上结构化的免疫-凝血交互网络，为后续纵向及机制研究提供了关键的生物化学参考框架。
摘要
本研究进行了一项针对1656名住院类风湿关节炎（RA）患者的大规模回顾性横断面分析，旨在系统性地描绘免疫标志物与凝血参数之间的关联，并评估这些关联在人口学和炎症因素之外的独立性和可重复性。通过多变量线性回归模型（校正了年龄、性别、红细胞沉降率[ESR]和高敏C反应蛋白[hsCRP]）进行分析，并将队列按入院日期中位数分为探索集和验证集。研究结果表明，共有十三组免疫-凝血关联在探索集和验证集中被一致地识别出来，支持了在实验室生物标志物水平上存在可重复的免疫-凝血耦合。
引言
RA是一种以持续性免疫活化为特征的全身性自身免疫性疾病。越来越多的证据表明，RA患者中存在凝血异常和血栓栓塞事件风险增加，促使学界对疾病背景下的免疫-凝血交互产生了浓厚兴趣。尽管免疫-凝血轴在RA发病机制中的作用日益被重视，但大多数先前研究集中于个体通路或特定生物标志物，缺乏系统性验证。因此，在实验室水平上，循环免疫标志物与常规测量的凝血参数之间的结构化关系仍未得到充分阐明。本大规模回顾性研究旨在填补这一空白，系统地评估和验证一组免疫标志物与关键凝血参数之间的关联，为理解RA中的免疫-凝血交互提供一个经过系统验证的实验室水平参考框架。
方法
研究设计与参与者
本研究纳入了1656名于2014年5月5日至2025年2月21日期间，在山东大学齐鲁医院（青岛）住院并被诊断为RA的患者。研究人群流程图清晰展示了从初始患者筛选、数据预处理到队列划分（以中位入院日期2021年11月26日为界，分为探索集[n=827]和验证集[n=829]）的全过程，以及后续的回归建模、验证和敏感性分析步骤。
实验室标志物
研究的免疫标志物包括类风湿因子（RF）、抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、补体C3和C4。凝血参数包括国际标准化比值（INR）、凝血酶原时间（PT）、PT活性、活化部分凝血活酶时间（APTT）、D-二聚体和纤维蛋白原。炎症标志物（协变量）包括ESR和hsCRP。基线特征表（表1）详细列出了研究人群各变量的均值、标准差、中位数和四分位距。
回归建模与验证策略
采用多变量线性回归来探索免疫标志物与凝血标志物之间的关联，并校正年龄、性别、ESR和hsCRP。为了评估稳健性，在探索集中识别出的具有统计学意义（P < 0.05）的关联，会使用完全相同的模型在不经过任何重新拟合的情况下，在独立的验证集中进行验证。在两个队列中均显示出方向一致且具有统计学显著性的关联，被认为是可重复的。
敏感性分析
为评估多重共线性和模型设定对结果可能产生的影响，研究采用了三种建模策略进行敏感性分析：包含所有免疫标志物的完整模型、排除高方差膨胀因子（VIF > 10）变量的简化模型，以及使用主成分分析（PCA）降低维度并捕捉潜在免疫学特征的PCA模型。
结果
基线特征与关联模式
患者的平均年龄为58.0岁，其中26%为男性。RF和ACPA的中位水平升高，与活动性RA一致。凝血指标如INR、PT和D-二聚体呈现轻度升高，而纤维蛋白原处于正常范围的高值。相关性分析显示，免疫标志物与凝血参数之间存在显著的成对相关性。
多变量回归与内部验证
在总队列（n=1656）中，经调整后发现免疫标志物与凝血参数之间存在多项显著关联。例如，IgG与INR（β = 0.004, P = 3.6×10-9）、PT（β = 0.063, P = 1.7×10-11）、D-二聚体呈正相关，与PT活性和纤维蛋白原呈负相关。ACPA和RF与APTT呈负相关。补体C3和C4与纤维蛋白原水平呈正相关。比较调整与未调整模型回归系数的点图直观地展示，大多数已验证的关联，特别是涉及IgG和ACPA的关联，在调整了人口统计学和炎症变量后，仍保持一致的方向和统计学显著性，表明其独立于年龄、性别、ESR和hsCRP。
关键的内部验证结果显示，共有十三组关联在探索集和验证集中均保持统计学显著。森林图汇总了这些已验证的关联，清晰地展示了各项关联的回归系数及其置信区间。这些经过验证的发现包括：
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IgG 与 INR升高、PT升高、APTT升高、D-二聚体升高、纤维蛋白原降低相关联。
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RF 与 APTT降低、纤维蛋白原降低相关联。
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ACPA 与 APTT降低相关联。
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C3 和 C4 与 纤维蛋白原升高相关联。
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C4 与 PT降低相关联。
这些关联支持了RA中存在稳健的免疫-凝血联系，并为本研究提出的概念框架提供了信息。
敏感性分析
已验证的关联在完整模型、简化模型和基于PCA的模型中均保持了其效应大小和方向，强调了研究结果的稳健性。
讨论
本项大规模回顾性研究系统性地描绘了RA患者中一组综合性免疫标志物与常规测量的凝血参数之间的关联。通过应用内部探索-验证框架和多重敏感性分析，识别出一组可重复的免疫-凝血关联，这些关联在很大程度上不受人口学特征和全身性炎症标志物调整的影响。重要的是，本研究旨在描绘实验室生物标志物水平上结构化的免疫-凝血耦合，而非评估临床结局或预后相关性。
在所检查的免疫标志物中，IgG在免疫-凝血关联网络中作为一个核心组分出现。它与多种凝血指标（INR、PT、APTT、D-二聚体、PT活性、纤维蛋白原）存在协调关联，表明体液免疫活性与凝血相关实验室参数之间存在广泛且结构化的对应关系。自身抗体如RF和ACPA表现出独特的凝血相关特征，特别是与APTT和纤维蛋白原呈负相关。补体成分C3和C4与纤维蛋白原水平呈强烈且一致的正相关，反映了它们与急性期反应和肝脏蛋白质合成的密切关系。总体而言，这些发现强调了RA中的免疫-凝血交互并非均质的，而是呈现出标志物特异性和结构化的模式。
从机制角度看，观察到的免疫-凝血关联与先前描述RA中免疫-凝血串扰的实验和转化研究结果一致。免疫球蛋白、自身抗体和补体成分可通过与内皮细胞、血小板、中性粒细胞相互作用以及影响肝脏途径，进而影响凝血相关的生物学过程。本研究结果与此类文献框架兼容，表明存在实验室生物标志物水平上协调的免疫-凝血耦合。然而，这些关联应被解释为生化对应关系，而非特定细胞事件或致病机制的证据。
研究的优势包括大样本量、对多种免疫和凝血标志物的系统性评估、内部验证以及跨多重敏感性分析的一致发现。但必须承认其重要的局限性。回顾性和横断面性质排除了因果推断，缺乏临床结局数据也限制了解释仅限于实验室水平的关联。由于回顾性数据集中治疗暴露记录不完整且不统一，无法调整药物效应。未纳入详细的药物数据（包括糖皮质激素、传统合成改善病情抗风湿药和生物制剂）是一个主要局限。此外，队列由住院RA患者组成，在高炎症状态下关联可能被放大，研究结果可能无法直接推广到稳定的门诊RA人群。总而言之，本研究结果最适用于住院或高疾病活动度的RA背景。
结论
这项大规模描绘性研究在RA中界定了一组经过内部验证的、可重复的免疫标志物与凝血参数之间的关联，揭示了实验室水平上结构化的免疫-凝血图景。研究结果并非暗示临床结局，而是为理解RA中的免疫-凝血交互提供了一个参考框架，并支持未来进行假设驱动的纵向或机制性研究。
