《Cancer Immunology, Immunotherapy》：CCL8-dependent recruitment of natural killer cells enhances the antitumor activity of neoadjuvant chemotherapy in gastric cancer
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新辅助化疗(NACT)如何重塑胃癌免疫微环境以提升疗效，其机制尚不明确。本研究聚焦NACT对自然杀伤(NK)细胞的影响，通过临床队列、小鼠模型与体外实验，揭示NACT通过激活肿瘤细胞MAPK通路诱导CCL8分泌，从而招募NK细胞。该机制为NACT联合NK细胞免疫治疗提供了全新理论依据和转化前景。
尽管新辅助化疗(NACT)已成为局部进展期胃癌(Gastric Cancer, GC)的标准治疗，但仍有部分患者获益有限。化疗药物一度被视为主要通过诱导非免疫原性细胞死亡来杀伤肿瘤细胞，但越来越多的证据表明，其还能重塑肿瘤免疫微环境(Tumor Immune Microenvironment, TIME)，这为联合免疫治疗提供了可能。其中，自然杀伤(Natural Killer, NK)细胞作为重要的先天性免疫效应细胞，其在NACT背景下的动态变化和作用机制尚不清楚。为此，研究人员开展了一项研究，旨在阐明NACT如何影响胃癌TIME，特别是NK细胞的功能与招募机制，为开发新型联合治疗策略提供理论基础。这项研究成果最终发表在《Cancer Immunology, Immunotherapy》期刊上。
为了探索NACT的免疫调节作用，研究者综合运用了多项关键技术。他们首先收集了33名接受NACT的胃癌患者的55份组织标本（包括22对配对的治疗前后样本），通过免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)分析了免疫细胞浸润的变化。同时，他们建立了小鼠皮下胃癌模型，通过流式细胞术、RNA测序(RNA-seq)和基因集富集分析(GSEA)等技术，在体内外验证了NACT对TIME的影响。为了深入探究机制，研究进行了体外Transwell细胞迁移实验、细胞因子芯片检测、蛋白质印迹(Western Blot)和实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)等，以明确信号通路和关键分子的作用。此外，研究者还利用基因缺陷小鼠（如Rag1?/?和NCG小鼠）和嵌合抗原受体自然杀伤细胞(Chimeric Antigen Receptor NK, CAR-NK)模型进行了功能验证，并在临床个案中初步评估了联合治疗的可行性。
NACT增强胃癌患者中NK细胞的浸润
研究人员分析了胃癌患者治疗前后的肿瘤组织，发现NACT后，包括CD8+T细胞、CD4+T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞(DCs)在内的多种抗肿瘤免疫细胞浸润均有所增加。其中，NACT后CD8+T细胞和NK细胞数量的增加与更佳的临床反应显著相关。
NACT促进肿瘤小鼠模型中NK细胞浸润和TIME重塑
在小鼠模型中，使用临床常用的SOX（S-1联合奥沙利铂）方案治疗，有效抑制了肿瘤生长。流式细胞术分析显示，肿瘤组织中CD8+T细胞、B细胞、DCs和NK细胞的比例增加，而调节性T细胞(Tregs)和中性粒细胞的比例下降，表明NACT重塑了TIME，使其向抗肿瘤方向倾斜。
NK细胞介导SOX方案的抗肿瘤疗效
通过对小鼠肿瘤组织进行RNA-seq分析，发现NACT后与细胞因子相互作用相关的信号通路被激活，且与NK细胞招募相关的趋化因子基因（如CCL2、CCL7、CCL8、CCL11）表达上调。利用免疫缺陷小鼠模型（Rag1?/?和NCG小鼠）进行验证，发现在缺乏T、B和NK细胞的NCG小鼠中，SOX方案的抗肿瘤效果显著减弱，提示NK细胞在该过程中发挥了关键作用。
肿瘤细胞在NACT期间介导NK细胞招募
为了探究肿瘤细胞是否直接参与招募NK细胞，研究者在免疫缺陷的NCG小鼠中构建了细胞来源的异种移植(CDX)模型。结果显示，SOX化疗联合靶向Claudin18.2的CAR-NK细胞治疗，能够协同抑制肿瘤生长，并进一步促进NK细胞在肿瘤中的浸润。体外Transwell实验也证实，经NACT药物处理的肿瘤细胞培养上清液能显著增强对NK92细胞的趋化作用。
NACT诱导CCL8表达以促进NK细胞招募
机制研究表明，NACT处理的胃癌细胞中，多种趋化因子表达上调。通过细胞因子芯片和RT-qPCR交叉验证，并结合生物信息学分析，锁定CCL8是关键分子。在体外，使用中和抗体阻断CCL8可显著减弱肿瘤细胞上清对NK92细胞的招募能力。在体内，阻断CCL8同样减少了肿瘤中NK细胞的浸润，并削弱了SOX方案的抗肿瘤效果。
MAPK激活驱动NACT诱导的CCL8表达
为了阐明SOX方案促进CCL8分泌的上游机制，研究人员进行了GSEA和蛋白质印迹分析。结果发现，NACT激活了胃癌细胞中的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase, MAPK)信号通路。使用特定的MAPK通路抑制剂（如p38抑制剂Adezmapimod、JNK抑制剂SP600125）处理后，NACT诱导的CCL8表达在蛋白和mRNA水平均被显著抑制。这表明MAPK通路的激活是NACT诱导CCL8分泌、进而招募NK细胞的关键上游事件。
NACT联合NK细胞输注的联合疗法获得临床获益
最后，研究者报告了一例晚期胃癌患者的个案。该患者接受了5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂化疗联合过继性NK细胞输注的三联疗法。治疗后，患者外周血中NK细胞的数量和比例均增加，白细胞介素-2受体(IL-2R)水平升高，肿瘤标志物CA199水平下降，腹水明显减少，胃部病灶缩小，显示出良好的临床反应。
研究结论与意义
本研究系统阐明了NACT重塑胃癌免疫微环境的新机制。其核心结论是：NACT（特别是SOX方案）能够激活胃癌细胞内的MAPK信号通路，进而诱导肿瘤细胞分泌趋化因子CCL8，CCL8则像“化学导航信号”一样，将具有强大杀伤能力的NK细胞招募到肿瘤部位。NK细胞的浸润增加直接贡献了NACT的抗肿瘤疗效。这一发现将传统的细胞毒化疗与先天性免疫紧密联系起来，揭示了化疗药物的免疫调节新功能。
研究的讨论部分进一步强调了其转化价值。首先，它弥补了以往研究多关注T细胞而忽视NK细胞的空白，明确了NK细胞是NACT疗效的重要贡献者。其次，鉴定出CCL8-MAPK这一全新的轴心机制，为预测NACT疗效提供了潜在的生物标志物（如肿瘤组织CCL8表达水平）。最重要的是，该研究为临床上将NACT与NK细胞免疫疗法（包括CAR-NK、细胞因子活化的NK产品等）相结合提供了坚实的理论依据。临床个案的积极结果初步验证了这一联合策略的可行性与潜力，提示化疗不仅能直接杀伤肿瘤，还能“改造”肿瘤微环境，使其对后续的免疫细胞治疗更加敏感。因此，这项研究不仅深化了对化疗免疫调控作用的理解，也为攻克胃癌治疗瓶颈、开发更高效的免疫联合方案开辟了富有前景的新方向。
