石仙桃内参基因筛选与应用

　　

摘要：

目的 石仙桃（Pholidota chinensis）系兰科（Orchidaceae）石仙桃属（Pholidota）珍稀濒危的多年附生草本植物，为了研究该物种及近源种功能基因的表达量，迫切需要筛选其稳定的内参基因用于实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析。 方法 采用RT-qPCR检测11个管家基因在石仙桃不同组织（根、根状茎、假鳞茎、叶片、芽、花序）和非生物胁迫（20 mmol/L MeJA和50 mmol/L NaCl喷洒叶片、不同光照强度）的表达量，用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCt和RefFinder几何平均值综合分析11个内参基因表达的稳定性。 结果 选取的11个基因在石仙桃的不同组织中具有单一的扩增条带和峰图，扩增效率及表达丰度基本达到了内参基因的要求，表达稳定性表明，Actin/f58p0可作为不同组织基因表达的最佳内参基因，而TUA3/f11p0可作为非生物胁迫的最佳内参基因。分别以Actin/f58p0和TUA3/f11p0作为内参基因对石仙桃中天麻素合成关键基因GT1、GT2、GT3-01、GT3-02、GT4、ADH-01、ADH-02、ADH-03表达分析，在不同组织中，二者表达趋势基本一致，但HCT基因表达则更适宜以Actin/f58p0作为内参基因；非生物胁迫中，以TUA3/f11p0作为内参基因更佳，尤其是在NaCl和MeJA处理中，但在光照胁迫下，Actin/f58p0和TUA3/f11p0皆可作为内参，MeJA较NaCl对石仙桃基因表达量影响时间长。 结论 Actin/f58p0和TUA3/f11p0分别可作为石仙桃不同组织、活性成分和非生物胁迫的内参基因，为石仙桃及近缘物种功能基因的发掘、表达量分析等研究奠定基础。