绿色与白色分析方法对一种创新RP-HPLC技术的评估：用于共制剂原型中溶菌酶和姜黄素定量分析，为更安全的治疗药物开发提供分子层面的见解

溶菌酶与黄连素复合物开发及同步定量分析，结合RP-HPLC与分子模拟技术，优化分离条件并探究相互作用机制，为新型抗菌药物提供理论依据。

　　

摘要

目的

日益严重的全球抗菌素耐药性健康危机凸显了迫切需要寻找比传统合成抗生素更安全、更有效的治疗替代方案。本研究探讨了一种新方法，将具有强抗菌特性的天然酶溶菌酶与具有多种药理作用的多酚化合物姜黄素结合在一起。我们的目标是提出并验证一种反相高效液相色谱（RP-HPLC）策略，以实现溶菌酶和姜黄素的同步定量分析，同时解决它们各自存在的问题，尤其是姜黄素生物利用度较低的问题。此外，我们还试图从分子层面了解它们之间的相互作用，以探究这种复合物增强治疗效果的潜力。

方法

分离过程在50°C下使用Zorbax 300 SB-C18柱进行。采用优化的梯度洗脱程序，流动相由0.1%三氟乙酸水溶液（溶液A）和0.1%三氟乙酸乙腈：水溶液（80:20，v/v）（溶液B）组成。检测波长为250 nm，流速为1.1 mL/min。为了补充分析工作，还进行了分子动力学（MD）模拟和密度泛函理论（DFT）计算，以研究溶菌酶-姜黄素复合物内的结构动态和电子相互作用。

结果

该方法在3至50 μg/mL的浓度范围内获得了超过0.999的相关系数（R），证明了出色的线性。对于溶菌酶，检测限和定量限分别为2.15 μg/mL和5.53 μg/mL；对于姜黄素，分别为1.76 μg/mL和3.34 μg/mL，其回收率分别为100.91%和100.26%。MD模拟显示，姜黄素在与溶菌酶结合时会发生显著的结构变形，而DFT分析表明其HOMO-LUMO能隙随之减小。这些计算结果揭示了姜黄素在蛋白质复合物中可能被激活的机制。

结论

这种新方法遵循了“绿色”和“可持续性”理念，如使用绿色能源和降低风险。更重要的是，这项结合实验和计算的方法为质量控制提供了一个经过验证的分析工具，并提供了关于溶菌酶-姜黄素相互作用的基本分子见解。这些发现为溶菌酶-姜黄素复合物作为有前景的治疗替代品的发展奠定了坚实的分析和分子基础。