《European Journal of Neurology》：Ten-Year Retrospective Study on the Diagnostic Value of Three-Site Skin Biopsy for Detecting pS129-α-Synuclein Biomarker: Cervical and Leg Dual-Site Biopsy as an Effective and Less Invasive Alternative
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这项研究旨在解决当前α-突触核蛋白病诊断中皮肤活检位点选择不统一、患者负担重的问题。研究人员对227名经三部位活检确诊的Lewy体病（LBD）和多系统萎缩（MSA）患者进行了回顾性分析，评估了不同位点组合的诊断效能。研究发现，颈部（CE）和远端腿部（LEG）双位点活检在LBD和MSA中均展现出最高的诊断灵敏度（分别达97.68%和100%），而大腿（TH）位点未能提供显著的额外诊断价值。该结果为优化活检方案、实现标准化临床实践提供了有力证据，是迈向更精准、更高效诊断的关键一步。
在神经科学领域，准确诊断帕金森病（Parkinson's disease, PD）、路易体痴呆（dementia with Lewy bodies, DLB）和多系统萎缩（multiple system atrophy, MSA）等突触核蛋白病（synucleinopathies）一直是临床医生面临的重大挑战。这些疾病在病理上的共同特征是大脑中异常聚集的α-突触核蛋白（α-synuclein）。近年来，科学家们发现了一个“金矿”——皮肤。在活体（in vivo）中，通过皮肤活检检测皮肤神经纤维中存在的磷酸化α-突触核蛋白（phosphorylated α-synuclein at serine 129, pS129-α-syn）已成为一种极具前景的诊断生物标志物，其灵敏度和特异性都相当可观。然而，问题随之而来：虽然前景广阔，但现实中各研究中心的操作“五花八门”，尤其是在“从哪里取活检”这个关键问题上——到底应该在颈部、大腿还是小腿取皮肤？取几个点？如何平衡诊断准确性与患者的舒适度，并最终实现标准化，使其能真正走进临床？这就像发现了宝藏，却没有统一的地图。为了解决这些不确定性，指导未来更优化的临床实践，一项大规模的研究应运而生。
为了探究这些问题，研究人员在意大利博洛尼亚神经科学研究所（IRCCS Institute of Neurological Sciences of Bologna）进行了一项为期十年（2013-2023年）的回顾性研究，相关成果发表在《European Journal of Neurology》。他们收集了227名确诊为Lewy体病（LBD，包括PD和DLB）或多系统萎缩（MSA）患者的临床数据。这些患者都曾遵循一套严格的三部位活检方案：从颈椎旁区（CE，颈7椎旁区域）、大腿（TH，髌骨上方15厘米）和远端腿部（LEG，外踝上方10厘米）这三个标准位置，各取两个3毫米的穿刺活检样本，总计六个样本。研究的目标非常明确：评估不同活检部位组合的诊断效能，探索能否找到一种既能保持高灵敏度，又能减少取样数量的“最佳组合”。
研究人员主要采用了标准化的免疫荧光技术作为核心检测方法。具体而言，他们从每个活检样本中获取10微米厚的切片，并使用针对pS129-α-syn和泛神经元标记物PGP9.5（protein gene product 9.5）的抗体进行双重免疫荧光染色。通过共聚焦显微镜观察，他们将pS129-α-syn信号与PGP9.5阳性神经纤维的共定位作为判断阳性的金标准，从而确保检测到的确实是神经纤维内的病理性α-突触核蛋白沉积，而非非特异性染色。在数据分析上，他们采用了严格的统计方法（如Fisher精确检验），系统地比较了单一位点（如仅CE）、双位点组合（如CE+LEG）以及传统三位点方案在检测阳性患者方面的诊断灵敏度，并按疾病亚型、性别和病程进行了分层分析。
3.1 颈部-小腿双位点皮肤活检对LBD检测具有高诊断准确性
该部分研究针对194名Lewy体病（LBD）阳性患者展开。通过分析不同活检部位的组合，研究人员发现，在所有的位点组合中，颈部（CE）和腿部（LEG）的双位点活检方案表现最为出色。该组合在整个LBD队列中的诊断灵敏度高达97.68%（189/194）。进一步按疾病持续时间（dd）分层分析显示，在病程≤2年的患者中，灵敏度为98.48%（65/66），在病程>2年的患者中，灵敏度为96.88%（124/128）。虽然原始数据显示在两种病程亚组中，男性的灵敏度均略高于女性，但统计分析表明，使用CE+LEG组合的诊断准确性不受性别或病程的显著影响。一个关键发现是，大腿（TH）部位在CE+LEG组合的基础上，未能提供显著的额外诊断价值。结论是，颈部-小腿双位点皮肤活检（每个部位取两个样本，切片厚度10微米）为LBD的检测提供了高灵敏度，同时可以省略大腿取样，从而在诊断准确性和患者耐受性之间找到了一个有效的平衡点。
3.2 颈部-小腿双位点皮肤活检对MSA检测具有高诊断准确性
在33名多系统萎缩（MSA）阳性患者中，研究人员采用了相同的分析策略。结果表明，在所有测试的部位组合中，颈部（CE）和腿部（LEG）的双位点取样同样表现最佳。无论性别或病程如何，该组合在所有亚组中均达到了100%的灵敏度。值得注意的是，尽管MSA患者数量相对较少，但结果同样具有启发性。例如，在早期疾病阶段（病程≤2年），仅腿部（LEG）活检就足以检测到所有患者的阳性结果（灵敏度100%）。此外，大腿（TH）和腿部（LEG）的远端组合也显示出极高的诊断价值，灵敏度达到97.92%（32/33）。这些数据共同支持了颈部-小腿双位点活检在MSA诊断中的应用价值，它同样可以作为传统三位点方案的一个可行且侵入性更小的替代方案。
综合以上结果，本研究得出了清晰而有力的结论。颈部（CE）和远端腿部（LEG）的双位点皮肤活检方案，在检测Lewy体病（LBD）和多系统萎缩（MSA）患者皮肤中的pS129-α-syn时，展现出了卓越的诊断准确性。对于LBD，灵敏度高达97.68%；对于MSA，灵敏度达到100%。研究证实，在这种优化组合下，大腿（TH）取样并未提供显著的额外诊断增益，因此可以安全地省略，从而在保证高灵敏度的同时，显著降低了患者的痛苦和操作复杂性。这一发现为实现更标准化、更易于临床推广的活检方案提供了关键证据。
在讨论部分，作者强调了本研究方法学的高度一致性（如统一的三部位活检、10微米切片、双重免疫荧光标记）是得出可靠结论的重要基石。这种标准化最大程度地减少了技术变异，使得评估“解剖部位选择”对诊断准确性的独立影响成为可能。研究还观察到一个有趣的、值得深入探讨的现象：不同疾病亚型间可能存在pS129-α-syn沉积的差异性分布模式。数据显示，LBD患者的阳性分布更广泛（近端和远端均有），而MSA患者则表现出以远端（腿部）为主的沉积倾向，特别是在疾病早期。虽然样本量有限，但这提示皮肤活检不仅具有诊断价值，未来或许还能为理解不同突触核蛋白病的疾病特异性病理生理机制提供线索。作者也客观指出了研究的局限性，如回顾性设计、MSA亚组样本量较小等，并指出需要更大规模、多中心的前瞻性研究来验证和扩展这些发现。
总之，这项研究具有重要的临床转化意义。它强力支持将CE+LEG双位点皮肤活检（每个部位2个3毫米穿刺样本） 作为一种灵敏、标准化且临床可行的体内诊断方法，用于LBD和MSA。这项研究不仅为优化临床诊断路径、减轻患者负担提供了直接证据，也为未来探索皮肤α-突触核蛋白沉积的拓扑学模式与疾病分型、分期之间的关系奠定了基础，有望推动皮肤活检成为神经退行性疾病诊断工具箱中的核心生物标志物检测手段。
