《Osteoarthritis and Cartilage》：Raloxifene injections normalize age-related mechanical sensitization in female and male mice and augment intervertebral disc structure in old female mice
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为应对椎间盘退行性病变(IVDD)导致的下背痛尚无有效疾病修饰疗法的临床挑战，研究人员开展了一项关于骨质疏松药物雷洛昔芬(Raloxifene)治疗作用的研究。结果表明，雷洛昔芬注射可降低雌雄小鼠机械性痛敏和椎间盘内P物质表达，并在雌性小鼠中改善IVDD、步态、生物力学性能及水合作用，提示其或可成为治疗年龄相关性IVDD所致疼痛的一种潜在疗法。
在老龄化社会中，下背痛是一种极为普遍且致残率高的健康问题，给个人和社会带来沉重负担。据统计，仅在美国，其相关成本就已超过1000亿美元。而导致下背痛的一个主要“元凶”，便是椎间盘退行性病变。正常的椎间盘就像脊柱中的“减震器”，其内部的亲水性蛋白聚糖能够结合大量水分，从而在承受身体重量和活动时提供缓冲和灵活度。然而，随着年龄增长，椎间盘会逐渐“失水”——细胞外基质降解，蛋白聚糖流失，导致椎间盘高度降低、结构改变、生物力学功能紊乱，甚至引发疼痛。目前，临床上尚缺乏能够有效延缓或逆转椎间盘退变进程、同时缓解疼痛的“疾病修饰疗法”。那么，有没有一种现有药物，可能被“老药新用”，为解决这一难题带来希望呢？
一项发表在《Osteoarthritis and Cartilage》期刊上的研究，将目光投向了雷洛昔芬。这是一种已获美国食品药品监督管理局批准、用于治疗和预防绝经后妇女骨质疏松症的药物。此前已有临床和临床前研究表明，雷洛昔芬可能增加椎间盘高度并缓解背痛，但其对诱发痛和自发痛相关行为的具体影响，以及在不同年龄和性别中的效果差异尚不明确。为此，研究团队开展了一项针对4月龄（青年）和24月龄（老年）雌雄小鼠的实验，旨在系统评估雷洛昔芬注射对椎间盘结构、功能及疼痛相关行为的影响，并探索其潜在作用机制。
为开展研究，作者运用了多项关键技术方法。在行为学评估上，使用校准的Von Frey单丝测定后爪机械性痛觉敏化（诱发痛），并利用DigiGait?系统分析步态动力学（自发痛）。在组织与分子层面，通过苏木精-伊红和番红O/固绿染色进行组织学分析，评定椎间盘退变等级；采用免疫组化技术检测椎间盘细胞中疼痛相关神经递质P物质和雌激素受体-α(ER-α)的表达。在生化与物理特性分析方面，利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析椎间盘基质成分（如结合水/蛋白聚糖比例）；通过轴向拉伸-压缩和扭转测试评估椎间盘的生物力学性能；并借助微型计算机断层扫描(μCT)和微型磁共振成像(microMRI)分别分析椎体骨微结构及椎间盘水合状态（以T2弛豫时间为标志）。研究对象为C57BL/6J小鼠，通过尾静脉注射雷洛昔芬（0.5 mg/kg）或PBS（载体对照），疗程包括为期4周（每周5次）和为期4天的短期方案。
研究结果
雷洛昔芬注射4周可缓解老年雌雄小鼠的年龄相关性机械性痛觉敏化，并使老年雌性而非雄性小鼠的步态站立期百分比向推进阶段偏移
衰老增加了雌雄小鼠对机械刺激的敏感性（诱发痛反应增强）。雷洛昔芬注射显著降低了4月龄和24月龄雌雄小鼠的机械敏感性。在步态分析中，衰老增加了雌雄小鼠的%制动站立期。雷洛昔芬注射使24月龄雌性小鼠的%推进站立期增加了4%，表明其向前运动更有效率，但对同龄雄性小鼠的步态无影响。
雷洛昔芬注射4周降低了青年和老年雌雄小鼠椎间盘内表达P物质蛋白的细胞比例
衰老降低了雌性小鼠髓核中表达P物质的细胞比例。雷洛昔芬注射显著降低了4月龄和24月龄雌性小鼠纤维环中表达P物质的细胞比例，在雄性小鼠中也观察到下降趋势。在髓核细胞中，雷洛昔芬也降低了P物质阳性细胞比例。
雷洛昔芬注射4周增加了青年和老年雌雄小鼠椎间盘内表达ER-α蛋白的细胞比例
衰老降低了雌雄小鼠纤维环中ER-α阳性细胞的比例。雷洛昔芬注射增加了4月龄和24月龄雌性小鼠纤维环中ER-α阳性细胞的比例，并增加了24月龄雄性小鼠纤维环中的ER-α阳性细胞比例。
雷洛昔芬注射4周通过FTIR检测发现增加了雌性小鼠而非雄性小鼠椎间盘细胞外基质成分和结合水表达
在雌性小鼠中，雷洛昔芬注射使24月龄椎间盘的结合水/酰胺I比值增加了20%，并增加了4月龄椎间盘的蛋白聚糖/酰胺I比值。这些变化在雄性小鼠中未出现。
雷洛昔芬注射4周降低了青年和老年雌性小鼠的椎间盘退变等级
在雌性小鼠中，衰老有增加椎间盘退变组织病理学评分的趋势。雷洛昔芬注射显著降低了4月龄和24月龄雌性小鼠的椎间盘退变总分，特别是降低了髓核退变评分，但对雄性小鼠的椎间盘退变等级无影响。
雷洛昔芬注射4周增强了椎间盘轴向机械功能
在雌性小鼠中，雷洛昔芬注射使4月龄椎间盘的轴向压缩刚度增加了48%，并呈现增加拉伸刚度的趋势。在雄性小鼠中，衰老或雷洛昔芬注射均未改变轴向或扭转机械刚度。
短期雷洛昔芬注射增强了椎间盘结构、功能和水合作用，并抑制了疼痛相关标志物P物质
对4月龄雌性小鼠进行为期4天的短期雷洛昔芬注射。结果显示，虽然椎间盘退变评分未变，但雷洛昔芬使椎间盘高度增加了11%，轴向压缩刚度增加了65%。同时，雷洛昔芬注射使纤维环中表达P物质的细胞比例降低了41%，但未显著改变ER-α阳性细胞比例。通过microMRI检测发现，4天的雷洛昔芬注射使目标椎间盘的MRI信号强度（反映水合作用）增加了4%。
结论与讨论
本研究证实，雷洛昔芬注射能在不同年龄和性别的个体中发挥缓解疼痛的益处，特别是在降低机械性痛觉敏化和椎间盘内疼痛相关神经递质P物质表达方面，效果在雌雄小鼠中均一致。然而，其在改善椎间盘结构和功能方面存在显著的性别差异：雷洛昔芬能有效降低雌性小鼠的椎间盘退变等级、增加细胞外基质成分、增强生物力学刚度并可能增加结合水，且这些益处能从青年期持续到老年期；但在雄性小鼠中，这些结构性改善甚微。此外，雷洛昔芬还能改善老年雌性小鼠的步态动力学，使其运动模式更高效。
研究的意义在于：首先，它揭示了雷洛昔芬缓解疼痛的作用可能独立于其对椎间盘结构的改善，这为理解椎间盘源性疼痛的复杂机制提供了新视角。其次，短期、低剂量的雷洛昔芬治疗即能观察到椎间盘水合作用和生物力学性能的快速改善，且不依赖于典型的雌激素受体信号通路上调，提示其可能存在不依赖于细胞合成、直接与胶原结合水分的生物物理机制。这为开发副作用更小、专注于增强基质水合作用的新型类似物提供了理论依据。最后，该研究强化了将已获批药物雷洛昔芬“老药新用”，重新定位为治疗年龄相关性、疼痛性椎间盘退行性病变的潜在疗法的可能性，尤其为目前缺乏有效非手术治疗方案的绝经后女性患者带来了新希望。尽管在雄性小鼠模型中观察到的结构性益处有限，但考虑到物种差异以及雷洛昔芬在男性骨代谢中的已知积极作用，其在男性中的潜在应用价值仍值得在未来临床研究中进一步探索。总之，这项研究为开发针对椎间盘退变及其相关疼痛的新型治疗策略奠定了重要的临床前基础。
