槲皮素和山柰酚在四棱西番莲（Passiflora quadrangularis L.）中的定量估计与细胞毒性研究

《Journal of Pharmaceutical Innovation》：Quantitative Estimation and Cytotoxicity Studies of Quercetin & Kaempferol in Passiflora quadrangularis L.

开发并验证了基于RP-HPLC的标准化方法用于同时测定叶绿素中槲皮素和山柰酚，并通过MTT法评估了其选择性抗增殖活性。研究确认kaempferol对MCF-7乳腺癌细胞（IC50=72.54 μg/mL）的抑制效果优于槲皮素（IC50=148.5 μg/mL），且对HUVEC正常细胞毒性显著较低，为中药质量控制和抗癌开发提供依据。

　　

摘要

背景

药用植物的标准化需要经过分析验证的标记物定量方法，并且这些标记物需要具有生物学意义。Passiflora quadrangularis L.是一种传统上被用作药材的植物，富含黄酮类化合物；然而，针对其关键黄酮醇标记物的基质特异性分析验证和基于选择性的细胞毒性评估仍较为有限。

目的

本研究旨在开发并验证一种基质特异性的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，用于同时测定P. quadrangularis叶片中的槲皮素和山柰酚含量，并评估这两种化合物对人类乳腺癌细胞（MCF-7）与正常人内皮细胞（HUVECs）的选择性细胞毒性。

方法

采用二元流动相系统并配备350 nm紫外检测器的RP-HPLC方法根据ICH指南进行了优化和验证，包括特异性、线性、精度、重复性、稳健性和系统适用性等方面的验证。在植物提取物和测试样品中对槲皮素和山柰酚进行了定量分析。通过MTT细胞毒性试验以及形态学评估和选择性指数测定，评估了所测定标记物的生物学意义。

结果

经过验证的方法能够获得分离良好、对称的色谱峰，槲皮素（约15.5分钟）和山柰酚（约16.5分钟）的保留时间一致，且未受到空白样品或基质成分的干扰。定量分析证实了这两种黄酮类化合物在不同样品基质中的可重复性测定结果。体外细胞毒性研究表明，山柰酚对MCF-7细胞的抑制作用更强（IC50 = 72.54 μg/mL），而其对HUVECs的毒性显著较低，从而显示出良好的选择性指数。形态学观察结果进一步证实了这些化合物的细胞毒性和选择性效应。

结论

本研究提供了一种经过验证的、符合监管要求的RP-HPLC方法，可用于Passiflora quadrangularis中槲皮素和山柰酚的同时定量分析，为可靠的质量控制和标准化提供了支持。特别是山柰酚所表现出的选择性细胞毒性，为这些标记物的生物学意义提供了依据，并突显了它们在植物药研发中的潜在价值。这种分析-生物学相结合的方法提升了P. quadrangularis》作为标准化草药资源在抗癌研究中的转化应用价值。