对循环介导等温扩增（LAMP）和CBNAAT在疑似结核性脑膜炎儿童中的诊断效能进行比较分析：一项横断面研究

《BMJ Paediatrics Open》：Comparative analysis of diagnostic efficacy of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and CBNAAT in children with suspected tubercular meningitis: a cross-sectional study

儿童结核性脑膜炎诊断中环介导等温扩增与 cartridge-based NAAT 效能比较显示LAMP敏感性更高但特异性较低，适用于资源有限地区快速筛查。

　　

摘要

结核性脑膜炎（TBM）在儿童中的诊断具有挑战性。现有的传统诊断方法灵敏度较低。基于卡式的核酸扩增测试（CBNAAT）需要合适的基础设施和技术专长。循环介导等温扩增（LAMP）越来越多地被用于TBM的诊断。针对儿童的研究较少。我们比较了CBNAAT和LAMP在50例临床疑似TBM病例中的诊断效果。LAMP的灵敏度较高（62.50%），但特异性较低（84.62%），而CBNAAT的灵敏度为41.67%，特异性为100.00%。两种方法的诊断一致性中等，Cohen’s kappa值为0.48。LAMP是一种适用于资源有限环境中的快速且灵敏的检测方法。

引言

结核性脑膜炎（TBM）仍然是导致儿童发病率和死亡率的主要原因之一。由于儿童结核病的菌量较少以及传统诊断方法的灵敏度较低，早期诊断仍然是一个挑战。本研究比较了循环介导等温扩增（LAMP）和基于卡式的核酸扩增测试（CBNAAT）在临床疑似TBM儿童中的诊断效果。

方法

这项横断面研究于2022年9月至2024年3月在一家三级医疗机构进行，研究前已获得伦理批准。根据国家结核病消除计划的标准，连续招募了50名6个月至14岁、临床疑似TBM的儿童参与研究，并获得了他们的知情同意。1详细记录了临床、影像学和实验室数据。在无菌条件下收集脑脊液（CSF）样本，用于抗酸染色显微镜检查（AFB microscopy）、CBNAAT、LAMP和分枝杆菌培养。CBNAAT在GeneXpert MTB/RIF NAAT系统上进行检测，该系统可自动进行实时PCR以检测M.tuberculosis和利福平耐药性。LAMP使用特定引物（F3、B3、FIP、BIP、LF和LB），在67°C下进行40分钟的等温扩增。由于LAMP只需要基本设备，因此可以在基层实验室实施，而无需复杂的NAAT平台。结果通过肉眼可见的SYBR Green染料进行可视化。统计分析使用SPSS V.16.0软件进行。灵敏度、特异性和诊断准确性是根据复合参考标准（CRS）2计算的，并给出了95%的置信区间（CI）。诊断一致性使用Cohen’s kappa值进行评估，按照标准分类解释。3在适当的情况下使用了Fisher’s精确检验，p值<0.05被认为具有统计学意义。

结果

在50名儿童中，27名为男性（54%），26名年龄在1至5岁之间（52%）。2名患者的脑脊液AFB显微镜检查结果呈阳性（4%），5名患者的脑脊液分枝杆菌培养结果呈阳性（10%），10名患者的CBNAAT检测结果呈阳性（20%），19名患者的LAMP检测结果呈阳性（38%）。CBNAAT和LAMP检测到的病例分布与CRS的对比见表1。

表1

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CBNAAT和LAMP检测到的病例数

将CBNAAT的结果与CRS相比，灵敏度为41.67%，特异性为100.00%。两者之间存在统计学上的显著关联（p<0.05），总体诊断准确率为72.00%。

将脑脊液LAMP的结果与CRS相比，灵敏度为62.50%，特异性为84.62%。两者之间存在统计学上的显著关联（p<0.05），总体诊断准确率为74.00%。脑脊液CBNAAT和LAMP与CRS的诊断性能总结见表2。

表2

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脑脊液CBNAAT和LAMP与CRS的诊断性能对比

将LAMP与CBNAAT相比，两种方法之间的一致性中等，具有统计学意义（Cohen’s kappa=0.48，p<0.001）。

将脑脊液CBNAAT和脑脊液LAMP与脑脊液培养结果进行比较，两者之间存在统计学上的显著相关性（p<0.05），Cohen’s kappa值分别为0.61和0.30，表明一致性较高和一般。

讨论

本研究表明，LAMP在诊断儿童TBM方面比CBNAAT和培养方法更灵敏。在我们的研究中，CBNAAT的灵敏度为41.67%，特异性为100%，诊断准确率为72.00%。这些发现与Rai等人的研究结果相当，他们报告的CBNAAT灵敏度为40%。4将脑脊液LAMP与CRS相比，灵敏度为62.50%，特异性为84.62%，诊断准确率为74.00%。Chauhan等人的研究也得到了类似的结果，他们发现LAMP的灵敏度为53%。5

虽然CBNAAT是一种得到WHO认可的快速检测方法：6但由于儿童结核病菌量较少，其在脑脊液中的灵敏度有限。培养方法耗时较长，不适用于早期诊断。LAMP方法成本低廉、快速且无需高端实验室设施，可作为有前景的初步检测手段，特别是在资源有限的环境中。将LAMP纳入TBM诊断流程可能有助于提高儿童的早期发现和临床治疗效果。