《Journal of Fungi》：Novel Nitric Oxide-Releasing Formulations Show Fungicidal Potential for Superficial Dermatophyte Infection
Aditya K. Gupta,
Elizabeth A. Cooper,
Lisa Miller,
Morgan Kearl,
Chris C. Miller,
Harmanpreet Kaur,
Najmeh Dorafshanian,
James Martins,
Simon J. L. Teskey and
Jeremy Road
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本研究针对日益严峻的皮肤癣菌（如红色毛癣菌、须癣毛癣菌）耐药问题，评估了新型一氧化氮释放剂NORS和NORG的潜力。通过体外杀灭、抑菌圈、扫描电镜等实验，以及针对足癣的初步临床试验，结果表明NORG能在1-2.83分钟内杀灭癣菌，有效穿透皮肤屏障，并显著降低患者临床症状。这为开发不易耐药的新型抗真菌疗法提供了有力依据。
在过去的几十年里，唑类和丙烯胺类药物的出现使得浅表性皮肤癣菌感染似乎变得容易治疗。然而，现实是这些微小而顽固的“脚气”真菌正在悄然进化，发展出对抗现有药物的“盔甲”——耐药性，使得部分感染久治不愈或反复发作，这让医生和患者都倍感棘手。为了应对这一挑战，科学家们将目光投向了一种人体内源性的、多才多艺的信使分子——一氧化氮（NO）。NO不仅参与免疫调节，还具有广谱的抗菌和抗生物膜能力。那么，能否利用它开发出一种不易产生耐药性的新型抗真菌武器呢？这正是《Journal of Fungi》上发表的这项研究所要探索的奥秘。本研究聚焦于一氧化氮释放凝胶（NORG）和溶液（NORS）这两种新型制剂，旨在从体外和临床两个层面，评估它们对抗皮肤癣菌感染的潜力，以期为应对日益严峻的真菌耐药性问题提供新的解决方案。
为了开展这项研究，研究人员综合运用了多种关键技术方法。在体外研究方面，他们选择了两种最主要的皮肤癣菌（红色毛癣菌和须癣毛痤菌）作为测试对象。通过时间-杀灭动力学实验评估了NORG的杀灭速度；利用合成真皮膜进行抑菌圈实验，评价了NORG在穿透屏障后保留抗菌活性的能力；并借助扫描电子显微镜（SEM）直观地观察了NORG对真菌细胞结构的破坏作用。在临床初步研究方面，研究人员在加拿大温哥华开展了一项小型的、针对足癣患者的随机、双盲、对照试验。他们将患者随机分组，分别使用NORS（一氧化氮释放溶液）或对照安慰剂（自来水）进行足浴治疗，并在治疗前后及随访时，通过临床症状严重程度评分和真菌学检测来评估疗效和安全性。
3.1. 体外测试：NORG的卓越抗真菌活性
研究人员通过一系列严谨的体外实验，系统评估了NORG的抗真菌潜力。
3.1.1. 抗真菌时间-杀灭动力学实验
NORG展现出惊人的快速杀真菌能力。在针对红色毛癣菌的所有实验重复中，仅需1分钟的接触即可实现完全杀灭。对于须癣毛癣菌，实现完全清除的平均时间为2.83分钟。相比之下，安慰剂凝胶在15分钟的整个观察期内未显示出任何杀灭效果。这表明NORG可能是一种杀真菌剂，而非仅仅抑制其生长的抑真菌剂。
3.1.2. 使用合成真皮膜的抑菌圈实验
此项实验旨在模拟真实临床条件下药物穿透皮肤后的抗菌效果。NORG能够有效穿透合成真皮膜，并保留其抗真菌效力。针对两种癣菌，NORG在第8天时显示出平均47.6毫米的抑菌圈，而对比药物Tolcylen（一种专利低表面张力递送载体的托萘酯溶液）的平均抑菌圈为30.3毫米，NORG的抗真菌效果平均高出57%。普通的托萘酯溶液则未能产生任何抑菌圈。这证明NORG具有优秀的透皮能力和持久的抗菌活性。
3.1.3. 扫描电子显微镜（SEM）
SEM图像为NORG的杀真菌机制提供了“眼见为实”的证据。未经处理的真菌细胞菌丝丰富，结构完整。而经过NORG处理后，真菌细胞的菌丝形成受损，表面形态遭到破坏，细胞壁上出现可见的穿孔，并伴有广泛的细胞裂解。这些剧烈的形态学变化确凿地证明NORG是一种杀真菌剂，而不仅仅是抑制其生长。
3.2. 针对足癣的NORS临床初步研究
研究人员进行了一项小规模的临床前导试验。20名中度足癣患者被随机分为NORS治疗组和安慰剂对照组。在治疗后第31天（治疗结束4周后），NORS治疗组的临床症状严重程度评分平均降低了67%，而安慰剂组仅降低了11.4%，差异极为显著。治疗结束后，症状改善仍在持续。在治疗组中，62.5% 的患者在第31天达到几乎痊愈的临床评分标准，而安慰剂组则为0。真菌学培养转阴率在NORS组为88%，远高于安慰剂组的25%。在安全性方面，所有参与者均未发生严重不良事件。虽然有少数轻微的治疗相关不良事件报告，但均为短暂性且可自行缓解。治疗期间未检测到环境一氧化氮浓度超标，也无任何患者出现高铁血红蛋白水平升高。
综合体外和临床初步结果，本研究的结论和讨论围绕一氧化氮释放制剂的巨大潜力展开。首先，NORG展示出快速、强效的杀真菌作用，其独特的机制（通过亚硝化和氧化反应，攻击真菌的巯基、脂质膜和核酸等多重靶点）不仅破坏真菌结构，还显著降低了产生耐药性的风险，这为应对传统唑类、丙烯胺类药物耐药性上升的难题提供了新策略。临床前导试验证实，NORS足浴能安全、有效地显著改善足癣患者症状，为这类制剂的实际应用提供了初步依据。
其次，这项研究揭示了NORG作为一种局部外用凝胶的多重优势。与需要处方或渗透力有限的现有药物相比，NORG能有效穿透皮肤屏障并保持活性，且有望作为非处方药使用，这极大地提升了患者可及性和治疗便利性。对于需要长期治疗但现有口服药存在肝损伤风险、外用处方药价格高昂且疗程漫长的甲癣，NORG显示出穿透甲板的潜力，前景广阔。
最后，尽管现有数据充满希望，但研究也指出了未来方向。需要更大规模、更长期的临床试验来确证其疗效的持久性、全面的安全性，并明确其在孕妇、哺乳期妇女等特殊人群中的应用信息。此外，一氧化氮的作用机制（如中间产物过氧亚硝酸盐或S-亚硝基硫醇的留存）及其长期耐药性潜力，仍需更深入的探究。总之，这项研究有力地支持了NORS和NORG作为新型局部抗真菌疗法的巨大潜力，其多靶点、低耐药风险的特性，以及非处方药的可能性，使其有望成为对抗顽固性浅表真菌感染的未来武器之一。
