Sennoside A 通过抑制 OSCP1/ERK1/2 通路来调节内皮功能障碍，从而改善糖尿病性动脉粥样硬化

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Sennoside A Ameliorates Diabetic Atherosclerosis by Inhibiting OSCP1/ERK1/2 Pathway to Regulate Endothelial Dysfunction

SA对T2DM小鼠动脉粥样硬化的抑制作用及其通过OSCP1/ERK1/2信号通路逆转内皮转分化的机制。

　　

摘要

目的

研究番泻苷A（SA）对2型糖尿病（T2DM）小鼠动脉粥样硬化（AS）的影响及其潜在机制。

方法

61只9周大的AopE^?/?小鼠通过随机数表随机分为6组：对照组、模型组（喂食高脂饮食4周后腹腔注射链脲佐菌素）、低剂量SA组、中剂量SA组、高剂量SA组（分别为每天15、30和45毫克/千克，持续8周），以及阳性对照组（每天给予100毫克/千克二甲双胍，持续8周，每组10或11只）。定期监测小鼠的体重和血糖水平。使用生化试剂盒测定血清脂质含量，并通过ELISA试剂盒检测空腹胰岛素水平。采用Oil Red O、HE、Masson和Picrosirius红染色法观察主动脉组织的病理变化。通过RT-qPCR检测CD31、VE-钙粘蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和波形蛋白的mRNA表达。利用Western blot分析有机溶质转运蛋白伴侣（OSCP1）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、血管内皮生长因子A（VEGFA）和p-ERK1/2蛋白的相对蛋白表达。体外实验中，通过高葡萄糖联合氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞功能障碍。这些细胞组包括空白对照组、模型组、不同浓度的SA组（1、30、100 μmol/L）、二甲双胍组（Met）、OSCP1敲低组、SA与OSCP1联合敲低组以及OSCP1过表达与SA联合组。在显微镜下观察细胞形态。使用CCK-8试剂盒评估细胞增殖情况，通过划痕试验评估细胞迁移能力，并通过Transwell试验测定细胞侵袭能力。mRNA和蛋白检测方法与体内实验相同。

结果

动物实验表明，SA和二甲双胍可改善T2DM小鼠的血糖、血脂水平和胰岛素敏感性，延缓AS进展并减少斑块面积（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比，SA和二甲双胍处理组增加了CD31和VE-钙粘蛋白的表达，降低了α-SMA和波形蛋白的mRNA表达，并减少了OSCP1、MMP9、VEGFA和p-ERK1/2的相对蛋白水平（P<0.05或P<0.01）。细胞实验显示，SA和二甲双胍可以抑制高葡萄糖和ox-LDL诱导的内皮细胞的形态变化、过度增殖和迁移（P<0.05或P<0.01）。mRNA和蛋白表达的趋势与动物实验结果一致。在si-OSCP1和si-OSCP1+SA组中，CD31和VE-钙粘蛋白的mRNA水平升高，而α-SMA和波形蛋白的mRNA水平降低（P<0.05或P<0.01）。此外，这些蛋白的相对表达水平下调（P<0.05或P<0.01），细胞形态变化和过度增殖得到逆转（P<0.01）。然而，OSCP1过表达则产生了相反的效果（P<0.05或P<0.01）。

结论

SA可减少T2DM小鼠的斑块面积并稳定斑块。其抗AS作用可能通过下调OSCP1/ERK1/2信号通路来实现，从而有助于逆转内皮细胞向间充质细胞的转化。